2-050518-HIV检测操作规程2-PA.doc

明胶颗粒凝集法（PA）（初筛试验） ——适用于日本富士公司PA（HIV 1/2）试剂盒 一、原理：日本富士试剂的成分是带有灭活的HIV抗原致敏的乳胶颗粒，抗原是通过去污剂裂解而纯化的，颗粒凝集试验是根据这些致敏颗粒与血清或血浆样品中存在的HIV抗体相互凝集的原理。 二、试剂内包含物： 冻干非致敏颗粒、冻干致敏颗粒、阳性对照、试剂溶解液、标本稀释液、吸头 三、其他所需物品和仪器： 一次性手套 一次性PA专用板 加样器（50μl、100μl、1ml）准确度±2％及一次性加样头 计时器 5％次氯酸钠或其他认可消毒液 适于盛装有可能受污染物品的容器 微板振荡器，用于混合试剂颗粒与样品 四、标本的收集和准备： 标本的收集详见“血液样品收集标准操作程序” 五、试剂准备 1、在开始实验之前标本和试剂应处于室温（18～25℃），实验应在室温下进行，使用后试剂放回2～8℃ 2、分别吸取试剂溶解液2ml于冻干非致敏颗粒试剂瓶和冻干致敏颗粒试剂瓶中，充分摇匀，如果已经是溶解的试剂，则只需充分摇匀 六、试验步骤 1、加75μl标本稀释液于第一孔，加25μl于第二孔与第三孔。 2、加25μl标本于第一孔，充分抽提混合3－4次，吸出25μl于第二孔，充分抽提混合吸出25μl于第三孔，充分抽提混合后弃去25μl。 3、加1滴（25μl）的非致敏颗粒于第二孔，加1滴（25μl）的致敏颗粒于第三孔。 4、用振荡器充分混合后盖上盖子，置室温（15℃～25℃）2小时后观察结果，注意：反应期间不得再次振荡 5、每次试验均要有阳性对照。 6、详细记录下试验步骤、试剂批号、有效期、试验时间及标本有关资料 七、结果判断 1、阴性反应：颗粒在孔中间聚集成圆形小块且边缘光滑 2、不确定反应：颗粒在孔中凝集成致密环状且边缘光滑 3、阳性反应：孔内有清晰的宽环且边缘粗糙 4、强阳性反应：孔内的凝集颗粒形成均一的膜覆盖在整个孔底 5、样品与非致敏颗粒呈阴性反应，与致敏颗粒呈阳性反应时为可疑阳性血清。 6、样品与非致敏颗粒及致敏颗粒均产生凝集者，则需将标本进行吸收处理后再检测。（见吸收步骤） 7、对于阳性标本均按照“HIV抗体初筛阳性标本处理制度”进行处理 八、吸收步骤 1、加350μl未致敏颗粒溶液于小试管中 2、加50μl标本于试管中，充分混合并于室温孵育20min（孵育期间用手摇动1－2次） 3、以2000rpm/min离心5min，小心地吸出上层液（标本稀释度1：8）50μl于PA板的第2孔 4、加25μl标本稀释液于微板的第3孔中 5、吸取第2孔内的液体25μl于第3孔中，充分抽提混合后弃去25μl。 6、加1滴（25μl）的非致敏颗粒于第二孔，加1滴（25μl）的致敏颗粒于第三孔。 7、用振荡器充分混合后盖上盖子，静置室温（15℃～25℃）2小时后观察结果，注意：静置期间不得再次振荡 8、每次试验均要有阳性对照。 9、详细记录下试验步骤、试剂批号、有效期、试验时间及标本有关资料 九、稀释倍数表 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释倍数 1:4 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 1:4096 1:8192 1:16384 福建省疾病预防控制中心作业指导书 文件编号： FJCDCXAT 002-2005 第 1 版 第 次修改 受控状态:非受控□ 受控□ 受控号： 3 页 共 3 页