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2-050518-HIV检测操作规程2-PA
明胶颗粒凝集法(PA)(初筛试验)
——适用于日本富士公司PA(HIV 1/2)试剂盒
一、原理:日本富士试剂的成分是带有灭活的HIV抗原致敏的乳胶颗粒,抗原是通过去污剂裂解而纯化的,颗粒凝集试验是根据这些致敏颗粒与血清或血浆样品中存在的HIV抗体相互凝集的原理。
二、试剂内包含物:
冻干非致敏颗粒、冻干致敏颗粒、阳性对照、试剂溶解液、标本稀释液、吸头
三、其他所需物品和仪器:
一次性手套
一次性PA专用板
加样器(50μl、100μl、1ml)准确度±2%及一次性加样头
计时器
5%次氯酸钠或其他认可消毒液
适于盛装有可能受污染物品的容器
微板振荡器,用于混合试剂颗粒与样品
四、标本的收集和准备:
标本的收集详见“血液样品收集标准操作程序”
五、试剂准备
1、在开始实验之前标本和试剂应处于室温(18~25℃),实验应在室温下进行,使用后试剂放回2~8℃
2、分别吸取试剂溶解液2ml于冻干非致敏颗粒试剂瓶和冻干致敏颗粒试剂瓶中,充分摇匀,如果已经是溶解的试剂,则只需充分摇匀
六、试验步骤
1、加75μl标本稀释液于第一孔,加25μl于第二孔与第三孔。
2、加25μl标本于第一孔,充分抽提混合3-4次,吸出25μl于第二孔,充分抽提混合吸出25μl于第三孔,充分抽提混合后弃去25μl。
3、加1滴(25μl)的非致敏颗粒于第二孔,加1滴(25μl)的致敏颗粒于第三孔。
4、用振荡器充分混合后盖上盖子,置室温(15℃~25℃)2小时后观察结果,注意:反应期间不得再次振荡
5、每次试验均要有阳性对照。
6、详细记录下试验步骤、试剂批号、有效期、试验时间及标本有关资料
七、结果判断
1、阴性反应:颗粒在孔中间聚集成圆形小块且边缘光滑
2、不确定反应:颗粒在孔中凝集成致密环状且边缘光滑
3、阳性反应:孔内有清晰的宽环且边缘粗糙
4、强阳性反应:孔内的凝集颗粒形成均一的膜覆盖在整个孔底
5、样品与非致敏颗粒呈阴性反应,与致敏颗粒呈阳性反应时为可疑阳性血清。
6、样品与非致敏颗粒及致敏颗粒均产生凝集者,则需将标本进行吸收处理后再检测。(见吸收步骤)
7、对于阳性标本均按照“HIV抗体初筛阳性标本处理制度”进行处理
八、吸收步骤
1、加350μl未致敏颗粒溶液于小试管中
2、加50μl标本于试管中,充分混合并于室温孵育20min(孵育期间用手摇动1-2次)
3、以2000rpm/min离心5min,小心地吸出上层液(标本稀释度1:8)50μl于PA板的第2孔
4、加25μl标本稀释液于微板的第3孔中
5、吸取第2孔内的液体25μl于第3孔中,充分抽提混合后弃去25μl。
6、加1滴(25μl)的非致敏颗粒于第二孔,加1滴(25μl)的致敏颗粒于第三孔。
7、用振荡器充分混合后盖上盖子,静置室温(15℃~25℃)2小时后观察结果,注意:静置期间不得再次振荡
8、每次试验均要有阳性对照。
9、详细记录下试验步骤、试剂批号、有效期、试验时间及标本有关资料
九、稀释倍数表
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释倍数 1:4 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 1:4096 1:8192 1:16384
福建省疾病预防控制中心作业指导书 文件编号: FJCDCXAT 002-2005 第 1 版 第 次修改 受控状态:非受控□ 受控□ 受控号: 3 页 共 3 页
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