G市某地管网末梢水有机污染物对雄性大鼠的生殖毒性及机制研究.Image.Marked.pdfVIP

贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 G 市某地管网末梢水有机污染物对雄性大鼠的生殖毒性及机制研究 专 业：劳动卫生与环境卫生学 研究生：王士然 导 师：杨光红 副教授 张爱华 教 授 摘 要 1 研究目的 对G 市某地水源水及管网末梢水中有机污染物成分进行检测分析，确定该地 饮用水中有机污染物种类，并对该地管网末梢水有机污染物的雄性生殖毒性及作 用机制进行研究，为该地饮用水卫生学评价及人群健康保护提供基础依据，并为 进一步加强水源污染治理提供参考。 2 研究方法 2.1 研究对象 按照随机区组设计，将40 只SD 雄性大鼠分为4 组(每组 10 只)，1 组为溶 剂对照组(予玉米油)，其余3 组为染毒组(染毒剂量分别为3、15、75L 水样中的 有机提取物/kgBW.day)。 2.2 G 市某地水源水及管网末梢水有机污染物的提取及检测分析 采集G 市某地水源水及管网末梢水水样，利用固相萃取技术提取水样中有机 污染物，采用气相色谱-质谱联用技术对水样中有机物成分进行检测分析。 2.3 G 市某地管网末梢水有机污染物致雄性大鼠的生殖毒性观察 利用萃取的管网末梢水有机污染物对雄性大鼠进行灌胃染毒。采用光镜和电 镜进行睾丸组织病理学检查；精子检测及评价参照国家标准进行；碱性磷酸酶 (AKP)、乳酸脱氢酶（LDH）、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT) 及琥珀酸脱氢酶(SDH)活 性检测采用微量酶标法及分光光度法；促黄体生成素(LH)、睾酮（T）及雌二醇 （E )水平应用直接化学发光法检测。 2 2.4 G 市某地管网末梢水有机污染物致雄性大鼠生殖毒性的机制研究 大鼠睾丸生殖细胞凋亡率采用TdT 介导的dUTP 缺口末端标记技术检测；采 用Western bloting 及实时荧光定量聚合酶链反应分别检测大鼠睾丸 Bcl-2 和 2 贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 Bax 的蛋白表达水平及基因mRNA 的转录水平。 3 结果 3.1 G 市某地水源水及管网末梢水有机污染物的提取及检测分析 定性分析显示，该地水源水水样中有机污染物有：十一烷、十四烷酸甲酯、 2-丙烯酸十五烷基酯、14-甲基十五烷酸甲酯、十六烷酸甲酯、十八烷酸甲酯、 顺式-9-十八烯酸甲酯、3,3-亚氨基二丙胺、苯甲酸甲酯、1,2-邻苯二甲酸二异 辛酯、1,2-邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)，共 12 种有机物。管网末梢水中除检出上述有机物外，还检出二氯乙酸、三氯乙酸， 共14种有机物。定量结果显示，水源水中DEHP及DBP分别为16.5µg/L和5.3µg/L， 管网末梢水中DEHP 及DBP 分别为16.4µg/L 和4.5µg/L，均超过《生活饮用水卫 生标准》的限值要求，其余有机物检测结果均符合标准要求或低于检出限。 3.2 G 市某地管网末梢水有机污染物对雄性大鼠的生殖毒性观察 染毒组大鼠睾丸附睾的重量及其脏器系数未见明显改变(P0.05)；光镜下， 低剂量大鼠睾丸出现间质细胞增生，中剂量睾丸生精小管管腔内细胞排列紊乱， 高剂量组可见生精小管上皮变薄，生精细胞间隙变宽，生精细胞疏松脱落进入生 精小管腔，生精上皮出现空泡变性；电镜下可见高剂量组退化精母细胞有空泡状 结构，细胞内存在大量脂滴，凋亡精原细胞核固缩、染色质沿核膜内侧排列呈戒 指状，低中剂量组亦未见明显变化。精子数量/附睾重量的比值随染毒剂量增加 而下降，但仅高剂量组的降低明显(P 0.05)；在中、高剂量组中，大鼠精子的 总畸形率、头颈部及尾部畸形率均明显升高 (P 0.05)；畸形类型主要有无头、 颈扭转、尾折叠、波状尾等。 生殖酶学检测发现：各染毒组的 AKP 活性明显下降，SDH 活性则明显升高 (P0.05)；LDH 的活性随染毒剂量的增加而降低，仅高剂量组的降低有统计学意 义(P0.05)；γ-GT 的活性则未见明显改变(P0.05)。生殖激素中，各染毒组LH 的改变不明显(P 0.05)；中、高剂量组的E 则明显升高 (P 0.