等温滴定量热法应用.docVIP

Example 2： Isothermal Titration Calorimetry for AIDS Drug Development 艾滋病药物的等温滴定量热法大量努力药物帮助艾滋病流行所造成病毒。热力学通过热力学解释实验热滴定数据作出了贡献。在艾滋病毒感染人体细胞，产生一系列艾滋病毒的复制步骤。受感染的细胞表达蛋白和蛋白酶；的作用蛋白酶切割聚蛋白一个新的艾滋病病毒。防止形成新的病毒通过引入药物。蛋白酶抑制剂分裂，如图2 – 2蛋白酶抑制剂可以传统的锁钥机制图2 – 3。抑制剂必须有正确的形进入艾滋病毒蛋白酶活性位点是“钥匙”，蛋白酶“锁”。 然而，因为突变，艾滋病毒蛋白酶活性位点可以不同的形式存在，如图2 - 3所示；活性位（锁）十，突变六边形。我们需要一药物（），不仅可以蛋白酶活性位点结合也。热力学可以帮助最佳候选药物。图2-4候选药物1和2。药物2比1具有更好的适应性，药物1相比的，它具有不对称的功能；甲苯称性比叔丁基。此外，药物2更因为它有两，而药物1只有一个。不对称和灵活药物提供额外的构象，可以适应一个艾滋病毒突变位点。定量衡量药物的效果，htaka和Freire利用等温滴定量热（）热力学分析数据。艾滋病毒蛋白酶抑制剂（）。我们定义一个解离常数Kd和它的倒数， Ka，下标d表示分离，ａ表示缔合。代表在水浓度。药物,我们Kd很小大。 A + B ----AB的反应中，A(蛋白酶)和B(抑制剂)由o标表示标准状态。 等温滴定量(ITC)提供了Kd(或?Ｈo。从以上我们计算?Go?So。 图2显示实验结果?Go, ?HoT?So，蛋白酶是原株状态。 在图2 – 5，第一代药物包含相对刚性分子（不）。蛋白酶活性相互作用组别的蛋白酶，因此，对这些药物，? Ho；在某些情况下，，绝对值小，而在其他情况下，?是最不利。然而，-T?So是有利的，因为结合后的疏水性药物释放水合分子随后的熵的增加。 ?Ｈo是负值，但-T／So不是很好，是因为：当灵活的钥匙进入被限制的锁，它不仅失去平移的自由，同时也失去了旋转的自由，这些损失导致了熵的降低，这是不好的，灵活的药物比刚性药物有更大的熵损失(|-T/So|更小)。平衡的不利熵损失较好的方法是更有牢固的结合（也就是更大的负值?Ｈo）。有图2-5可知，药品11和12是最好的，因为?Ｈo和?Go都较大且都是负值。 蛋白酶基因的突变是很常见的，所以我们需要找出一种抑制剂，它对原株蛋白酶有效，同时至少也对一些突变株的蛋白酶有效 从图2-6显示了不同抑制剂对原株蛋白酶和突变株蛋白酶的等温滴定量热的结果，纵坐标是解离常数Kd，我们希望Kd越小越好。从图中可知大的负值?Ｈo是很重要的，适应性好的11和12号药物对原株蛋白酶和突变株蛋白酶都具有较小的解离常数。我们从图2-5的结果可知抑制剂11和12拥有这两种有利的特点?Ｈo和?Go都较大且都是负值，但从图2-6我们可以知道，虽然抑制剂11和12对原株蛋白酶的抑制作用都很好，但11对突变株蛋白酶的抑制作用更好，11优于12. 图2-6 10种抑制剂对原株蛋白酶和突变株蛋白酶的解离常数 对于灵活的抑制剂，熵损失更大，这个损失是不利的，因为它降低了负值?Go的绝对值。我们希望得到一种抑制剂，它既有大的负值?Ho，同时对突变株的蛋白酶也是有用的。这种抑制剂不必太灵活，以免熵损失很大。这个例子表明热力学研究对识别最优的HIV抑制剂有指导作用。