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现代生物学导论 生物化学与分子生物学部分(IV) DNA复制,基因表达, 重组DNA技术 窦震 合肥微尺度物质科学国家实验室  中心法则/central dogma  The enzymes involved in the information chain  DNA复制是指DNA双链在细胞分裂间期进行的以一个亲代DNA分子为模板合成子代 DNA链的过程。复制的结果是一条双链变成两条一样的双链（如果复制过程正常的 话），每条双链都与原来的双链一样。(排除突变等不定因素) 沃森和克里克在提出DNA的双螺旋结构模型时就对DNA的复制过程进行了预测。由于 DNA碱基对的配对原则，两条链是互补的，因此，双链中的任意一条链都含有完整的 遗传信息。沃森和克里克推测，在DNA复制过程中氢键首先断裂，双螺旋解旋并被分 开，每条链分别作为模板各自合成一条新的互补链。这样就产生了两个与原来DNA分 子的碱基顺序一样的新的DNA分子。而新DNA分子的一条链来自亲代DNA分子，另一 条链是新合成的，因此，这种复制方式称为半保留复制。 Play movie! DNA replication   复制可以分为以下几个阶段 ?起始阶段：DNA解旋酶在局部展开双螺旋结构的DNA分子为单链，引物酶辨认起始 位点，以解开的一段DNA为模板，按照5到3方向合成RNA短链。形成RNA引物。 ?DNA片段的生成：在引物提供了3‘-OH末端的基础上，DNA聚合酶催化DNA的两条链 同时进行复制过程，由于复制过程只能由5’-3‘方向合成，因此一条链能够连续合成， 另一条链分段合成，其中每一段短链成为冈崎片段(Okazaki fragments)。 ?RNA引物的水解：当DNA合成一定长度后，DNA聚合酶水解RNA引物，补填缺口。 ?DNA连接酶将DNA片段连接起来，形成完整的DNA分子。 拓扑异构酶 DNA聚合酶 DNA replication is much more complicated than the above figure Please think about: -DNA don’t exist as a naked molecule, but as nucleosometogether with histonecore. New nucleosomesare assembled behind the replication fork. -DNA is a very long molecule. Thus, one DNA molecule is easy to form knotswith itself or other DNA molecules. DNA Topoisomerase -Which positiondoes a DNA molecule start to replicate itself? One start point or multiple start point? fixed position or random position? -How does DNA stop its replication? -What is the mechanism of faithful DNA replication? Error correction  环状DNA的复制眼形成θ结构 复制子(Replicon)：基因组中能独立进行复制的单位称为复制子 每个复制子都含有控制复制起始的起点，可能还有终止复制的终点。复制是在起 始阶段控制的，一旦开始，就继续下去直道真个复制子完成复制。     端粒不仅解决了末端复制的问题，也保护基因组的稳定性。 当端粒功能丧失时，染色体末端会互相连接，导致遗传信息的混乱。 转录/Transcription是遗传信息由DNA转换到RNA的过程，是DNA指导下RNA的合 成。 作为蛋白质生物合成的第一步，转录是mRNA以及非编码RNA（tRNA、rRNA等）的合 成步骤。 转录中，一个基因会被读取、复制为mRNA；就是说一特定的DNA片段作为模板，以 DNA依赖的RNA聚合酶作为催化剂而合成前体mRNA的过程。 转录的起始是由DNA启动子(Promoter)控制的,控制终止的部位称为终止子(terminator). Transcription can be explained easily in 4 or 5 simple steps, each moving like a wave along the DNA. RNA polymerase unwinds/unzips the DNA by breaking the hydrogen bonds between complement