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液相注意事项 张洁 HPLC如何得到好的结果 … 流动相 缓冲液 / 溶剂选择, 梯度优化, 流速选择 脱气，流速稳定, 流动相制备 柱 高柱效, 二级作用力, lot variation, 温度控制 检测 灵敏度, 选择性, 温度波动影响 样品 提取方法选择, 样品溶剂选择, 氧气影响 仪器 性能, 稳定性, 耐用性, 易操作性 综合评估 分析技术的稳定性,可靠性, 定量准确性 流动相注意事项 有机溶剂流动相: –室温下密封,避光保存 ??缓冲盐流动相: –当日现配现用 –低温下密封保存,一般不超过3天 –防止微生物生长 ??有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: –低温密封保存 –防止有机相的挥发 ??选用适宜的容器 保存于聚乙烯瓶中的超纯水 保存于棕色玻璃瓶中的超纯水  流动相过滤 溶剂的过滤 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜： 适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适 用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜： 蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 流动相脱气 脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 流动相脱气目的 1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用 色谱柱维护 色谱柱故障 柱子 故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变 解决措施：清洗 正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸 色谱柱故障 1. 柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙） 2. 样品劣化 （生成氧化物、分解物等） 色谱柱 延长柱寿命方法： 倒冲柱 换过滤片 修补柱头 色谱柱修复 色谱柱修复 色谱柱修复 液相色谱仪流程图 液相色谱仪容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压， 使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗 液相色谱容易出问题的部件 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗 液相色谱容易出问题的部件 故障：密封圈磨损而导致 密封不良 现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封圈 注意点： 更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （P－SET） 液相色谱容易出问题的部件 故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压力偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清洗 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则可能堵塞。 液相色谱容易出问题的部件 手动进样阀 故障：转子密封损坏 现象：漏液 原因：a 拧的太紧 b 样品太脏 c 针头损坏或不使用液相专用针 解决措施：更换转子密封，并在使用 时注意保养 液相色谱容易出问题的部件 手动进样 故障：载样困难 原因：a 定量环堵塞 b 进样器污染 解决措施：清洗或更换定量环、进样器 自动进样器的使用 自动进