NIYU 分子生物学 第七章 调控(part1).pptVIP

（四）DNA的甲基化与基因表达调控 DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。 真核DNA中的胞嘧啶约有5%被甲基化为5-甲基胞嘧啶，这种甲基化最常发生在鸟嘌呤的旁边（CpG）。活跃转录的DNA段落中胞嘧啶甲基化程度常较低。研究证实， CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化导致了人体1/3 以上由于碱基转换而引起的遗传病。 （五）转录基因的染色质结构 1、转录基因的染色质结构 ：转录的基因全部位于常染色质中，处于异染色质中的基因则不表达(高凝聚的染色质结构阻止基因转录)。在一个特定的时间内，只有一部分常染色质的基因在表达。 2、组蛋白的修饰作用 ：活跃进行基因转录的染色质区段常有H1组蛋白水平降低、H2A、H2B组蛋白二聚体不稳定性增加、组蛋白乙酰化和泛素化（obiquitination）、以及H3组蛋白巯基化等现象，这些都是核小体不稳定或解体的因素。转录活跃的区域常缺乏核小体的结构。 3、转录活跃区域对核酸酶敏感度增加，出现了对DNaseⅠ高敏感点。在高敏感点区域内，核小体结构不存在或是不同寻常。 二、真核基因转录水平的调控 真核基因调控主要在转录水平上进行，受大量特定的顺式作用元件和反式作用因子调控。 （一）顺式作用元件(cis-acting elements) 顺式作用元件：不编码任何产物的DNA片段，能影响与之相联系的同一条DNA链上的基因表达。启动子、增强子属于顺式作用元件。 （二）反式作用因子（trans-acting factors） 反式作用因子：由调节基因编码，其编码产物（RNA或蛋白质）可以扩散、控制其它基因的表达（转录因子）。反式作用因子能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率。 反式作用因子（转录因子）从功能上分析其结构包含： ① DNA结合域（DNA binding domain） ② 转录激活域（activating domain）：不与DNA直接结合的转录因子没有DNA结合域，但能通过转录激活域直接或间接作用于转录复合体而影响转录效率。 ③ 连接区 即连接上两个结构域的部分。 迄今发现的转录因子中，其DNA结合域有四种类型： ① 螺旋-转角-螺旋（helix-turn-helix，HTH）： 这类蛋白质中至少有两个α螺旋，它们之间由短肽段形成的转角或环连接，其中位于大沟中的α螺旋对于识别DNA具有决定性的意义。 ② 锌指结构（zinc finger）：锌以4个配价键与4个半胱氨酸、或2个半胱氨酸和2个组氨酸相结合。每个重复的“指”状结构约含23个氨基酸残基，整个蛋白质分子可有2-9个这样的锌指重复单位。每一个单位可以其指部伸入DNA双螺旋的大沟，接触5个核苷酸。 ③ 亮氨酸拉链（basic-leucine zipper bZIP）：这类蛋白质分子中每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基，结果就导致这些亮氨酸残基都在α螺旋的同一个方向出现。两个相同结构的两排亮氨酸残基就能以疏水键结合成二聚体，二聚体的另一端的肽段富含碱性氨基酸残基，借其正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸基团结合。 碱性-螺旋-环-螺旋（basic-helix/hoop/helix,bHLH） * 目前对基因表达调控机理的了解大部分是来自细菌系统的研究。真核生物中基因表达的情况复杂，了解较少。为此，我们主要讨论原核生物基因在转录水平上的表达调控。 * 至少在第一个结构基因5?ˉ侧具有核糖体结合位点(ribosome binding site，RBS)， * ｚ基因5’侧具有大肠杆菌核糖体识别结合位点特征的SD序列，因而当乳糖操纵元开放时，核糖体能结合在转录产生的mRNA上，沿此多顺反子mRNA移动，依次合成这基因群所编码所有的蛋白质。 * 当大肠杆菌在没有乳糖的环境中生存时，lac操纵元处于阻遏状态。， 当有乳糖存在时，乳糖受β-半乳糖苷酶的催化转变为别乳糖，与R结合，使R构象变化，失去与ｏ的亲和力，与ｏ解离，基因转录开放，使β－半乳糖苷酶在细胞内的含量可增加1000倍。这就是乳糖（实际起作用的是别乳糖）对lac操纵元的诱导作用。 * 等于告诉细菌“整个氨基酸都不足，即使合成色氨酸也不能合成蛋白质，不如不合成以节省能量” * 和原核生物主要在转录水平上进行调控的情况相比，真核生物基因表达调控的活动范围更大，包括DNA水平、转录水平、转录后水平、翻译水平等许多层次的调控。然而，真核生物和原核生物一样，转录水平上的调控是最主要的调控。 * 如果用基因打靶的方法除去主要的DNA甲基化酶，小鼠的胚胎就不能正常发育而死亡，可见DNA的甲基化对基因表达调控是重要的。