细胞培养的概述2010 9 18-.pptVIP

林 红 025五台校区1号教学楼147室 ;内 容;第一部分 细胞培养基本理论;一 细胞培养概述;; 细胞培养（cell culture） 模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养 （mass culture） 将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养 （clone culture） 即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 ;;黑色素瘤细胞 单克隆;组织培养（tissue culture） 指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点： 组织不失散，细胞保持原有的组织关系。 形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。 在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 ;器官培养（organ culture） 将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点： 培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。 观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。;细胞培养定义;二 细胞简史;;Historical events in the development of cell culture;Contd..;Contd..;Contd..;细胞培养技术的发展;三 细胞的形态和类型;细胞的多形性 细胞形态上表现为多种多样，如呈圆形、椭圆形、正方形、柱形、扁平形、梭形、星形和多边形等。此外，有些细胞如吞噬细胞没有固定的形态。 由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。 呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态。 ;细胞来源;细胞培养的形态与结构;细胞培养的形态与结构;细胞生长方式和类型; 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。 如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。 成纤维型细胞 皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞 ; 成纤维型细胞 梭形或不规则三角形 中央有卵圆形核 胞质向外伸出长短不同的突起 中胚层间质起源;;生长方式和类型;生长方式和类型;生长方式和类型;生长方式和类型;生长方式和类型;;细胞培养的形态与结构;细胞培养的形态与结构;;细胞培养的形态与结构;;细胞培养的形态与结构;四 贴壁型细胞的生长特点;贴壁型细胞的生长特点;贴附和伸展（attached and strench);接触抑制（Contact inhibition）;生长的密度限制（Density Inhibition）（又称：密度依赖性调节）;生长过程;细胞系的生长过程;原代培养（Primary Culture）期; 原代培养? （primary?culture） 从动物机体取出的进行培养的细胞群。生长缓慢，繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长。 ; The American Type Culture Collection (ATCC) ATCC（American Type Culture Collection）为美国典型培养物保藏中心，是世界上最大的﹑保存生物种类和数量最多的机构，保存微生物﹑藻类、原生动物、细胞株等约29000株。细胞株价格一般在4000人民币/株左右，一般1到2个月到货，基本上以冻存管的形式提供。 The European Collection of Animal Cell Culture (ECACC) National Institute of Health (NIH), USA National Cancer Institute (NCI), USA;传代培养期（ Passage）;体外培养的细胞增殖能力不是无限的，传代次数有一定的界限，称为“ Hayflick极限”。 传代次数与物种寿命有关：小鼠寿命3年，传代12次；龟寿命200年，传代140次。 传代次数与个体年龄成反比：人胚胎，40-60代； 幼年，20-40代；成年，10-30代；早老病儿童，2