过氧化物酶A4Prx在毕赤酵母中优化表达.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.5 过氧化物酶A4-Prx在毕赤酵母中的优化表达 1 2 1 1 1 1 陈艺 ，朱珍 ，吴晖 ，钟凤 ，唐语谦 ，赖富饶 （1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）（2.广州市轻工职业学校，广东广州 510650） 摘要：以来源于不动杆菌Acinetobacter sp . SM04 的过氧化物酶A4-Prx 的毕赤酵母工程表达菌株GS115/pPIC9K-A4-Prx 为研究 对象，优化其表达培养条件以提高该菌株对于目的蛋白 A4-Prx 的表达量。本论文首先研究了培养基成分与诱导条件对表达量的影响， 结果表明培养基的pH 、甘氨酸浓度和诱导温度对外源蛋白的产量均有显著影响。采用Box-Behnken 设计，利用 Design Expert 软件进 行二次回归分析得到了目的蛋白的最优表达条件为：诱导培养基 pH 7.0 、甘氨酸浓度为0.11%及诱导温度 30 ℃。在此优化条件下重 组蛋白的理论表达量达 129.87 mg/L，约为未优化下的2 倍，实验验证实际表达量达 128.94 mg/L，且重组表达的过氧化物酶A4-Prx 对酒糟蛋白饲料（DDGS ）和食品中的玉米赤霉烯酮毒素（Zearalenone ，ZEA ）具有高效降解能力。本研究为过氧化物酶的工业化高 密度发酵奠定了基础，推动生物降解ZEA 研究的进展。 关键词：过氧化物酶；毕赤酵母；玉米赤霉烯酮；响应面分析；生物降解 文章篇号：1673-9078(2014)5-209-217 Fermentation Optimization of a Novel Recombinant Peroxiredoxin in Pichia pastoris for Zearalenone Detoxification 1 2 1 1 1 1 CHEN Yi , ZHU Zhen , WU Hui , ZHONG Feng , TANG Yu-qian , LAI Fu-rao (1.School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) (2.GuangZhou Vocational School of Light Industry, Guangzhou 510650, China) Abstract: In order to maximize the expression of a novel peroxiredoxin purified from Acinetobacter sp . SM04 in recombinant Pichia pastoris GS115/pPIC9K-A4-Prx, a single-factor test coupled with response surface methodology (RSM) was used to adjust the induction condition. The results showed that pH value, temperature and glycine concentration were significant influencing factors for A4-Prx expression, and the optimized induction conditions were as follows: pH 7, 0.11% glycine at 30 ℃, and the theoretic yield of A4-Prx co