神经系统动物模型2.ppt

130 二、戊四氮惊厥发作阈值模型 ? [造模原理] 戊四氮(戊四唑)为中枢神经兴奋药，是常用的致惊剂，主要作用于脑干及大脑，使兴奋性突触的易化过程增强而引起惊厥发作。在阈剂量时，能使动物发生阵挛性抽搐。 [操作步骤] 1.取健康小鼠，随机分组，先给予受试药，根据其药后发生最大作用的时间(通常为0.5~1h)，由皮下或腹腔注射阈剂量的0.5%戊四氮溶液: 小鼠皮下注射的97%惊厥剂量为85mg/kg体重，腹腔注射为100mg/kg体重 2.随即单独放在玻璃罐内，观察出现惊厥的动物数。 [观察指标] 动物注射戊四氮后30 min内出现阵挛性发作(胡须、下颌骨及前肢产生阵挛性发作)为造模成功。 记录各组发生阵挛性发作的动物数，计算受试药的抗阵挛发生率。 [模型评价] 本模型是筛选癫痫小发作治疗药物的常用方法，一般认为，能明显对抗戊四氮惊厥的药物，对临床小发作型癫痫可能有效。也可用大鼠制备此模型，大鼠戊四氮最小阈发作剂量一般采用70mg/kg体重，皮下注射。 三、谷氨酸钠致惊厥发作模型 四、士的宁致惊厥发作模型 五、青霉素致癫痫发作模型 [注意事项] 部分动物在阵挛性惊厥后，可发生强直性惊厥以致死亡。不同品系小鼠持续惊厥后的死亡发生率差异甚大，应予注意。 六、听源性癫痫发作模型 [造模原理] 强烈的铃声刺激造成听觉中枢过度兴奋，而后扩散到邻近的运动中枢，使某些敏感动物(主要是鼠类)产生一种定型的运动性发作。 [操作方法] 体重250~300 g雄性大鼠。听源性惊厥箱。 1.制作一密闭的、双层隔音的听源性惊厥箱，内箱大小为60cm×35cm×45cm，箱顶安装一个电铃，箱内音量可达100～200 dB（分贝），箱内有灯光照明。 2.挑选听源性发作敏感的大鼠 将大鼠置于听源性惊厥箱内，给予铃声刺激90s，以能产生奔跑或惊厥者为实验对象，以后每日以相同条件刺激1次，连续5d，选反应恒定者用于实验。 强铃声刺激后，大鼠能产生一种特有的发作，称为听源性发作，以其严重程度按以下等级计分： 1级：阴性反应，计0分； 2级：奔跑1次，计10分； 3级：奔跑2次，中间有一短暂的休止期，计20分； 4级：奔跑1次，惊厥1次，计30分； 5级：奔跑2次，惊厥1次，计40分。 大鼠发作后可处于不同程度的木僵状态。实验时以大鼠听源性发作的严重程度计分，求得给药前后的平均分数，以判定药物疗效。 [注意事项] 1.实验前应筛选对铃声刺激有反应的大鼠，铃声刺激持续90s，反应阴性者弃之不用。 2.每次刺激应控制条件一致。 3.在正常大鼠或小鼠中，听源性发作的阳性率较低，可以采用一些药物提高大鼠发作的敏感性，如用亚惊厥剂量的戊四氮(16mg/kg体重)、士的宁(1mg/kg体重)，然后给予铃声刺激，可使部分阴性鼠产生“听源性发作”。 国外常用对声刺激敏感的纯系小鼠DBA/2J，国内北京医科大学培育出听源性惊厥易感大鼠(P77PMC大鼠)。 七、实验性慢性癫痫模型 (一)腹腔注射海人酸诱发大鼠慢性癫痫模型 [造模原理] 海人酸又称红藻氨酸或海藻氨酸(kainic acid)是从日本一种海藻中提取的兴奋性氨基酸谷氨酸的结构类似物，其神经兴奋作用比谷氨酸强30~100倍。 全身或局部给予致惊厥剂量的海人酸，可以选择性的激活边缘系统，引起急性癫痫发作及以后长期反复发作。 [操作方法] 雄性Wistar大鼠，体重200~250 g。海人酸，用生理盐水将其配成2mg/ml。 1.模型组大鼠腹腔注射海人酸10mg/kg体重，对照组大鼠腹腔注射生理盐水5ml/kg体重。 2.大鼠行为观察 6级评定法: 0级，无任何发作迹象 Ⅰ级，凝视，头面部轻微颤动 Ⅱ级，点头或湿狗样抖动(动物突然抖动身体)、搔抓 Ⅲ级，前肢局限性惊厥 Ⅳ级，具有后肢站立的全身强直性惊厥 Ⅴ级，具有站立伴摔倒的全身强直–阵挛性发作。 有3次以上出现Ⅳ～Ⅴ级发作，即被认为达到癫痫状态。 [结果] 模型组大鼠在腹腔注射海人酸后10~20 min, 进入潜伏期，大鼠由自由活动状态逐渐转为安静或伏卧，随后出现眼神呆滞，头面部肌群稍有轻微颤动。然后进入小发作期，出现湿狗样抖动，同时伴有眨眼、抖耳和搔抓动作。 继而逐渐进入大发作期，重者表现为全身肌肉强烈抽动，尖叫，口角流涎，四肢僵直或突然跳跃，直立，翻滚，摔倒，发作持续约2~5min。然后，自行恢复，随后又发作。对照组大鼠则无上述癫痫发作行为。 显著的病理改变特点是海马CA3区神经元死亡