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(4) Fluorescence microscopy To display the certain molecules or cells with fluorochromes (itself or labeled, or injected) which absorb radiation of ultraviolet wavelength and release a portion of the energy in the form of longer wavelength, visible light against a dark background. ?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 ?在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白(GFP)的应用 五、放射自显影技术 ?原理及应用： ?利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究； ?实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。 ?步骤： ?前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记） ———放射自显影 (5) Video microscopy and image processing To view by film or TV with Video camera and furthermore, by image processing using computer. Increase the sensitivity to light at very low illumination (particularly, for living cells). Enhance the contrast, bellow the limit of resolution of light microscope. Digitalisation, to be subjected to various types of mathematical analysis. 录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的微分干涉显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动 2 )? Microscopy techniques (1) Fixation and section Whole mount and Section Tissue or cells fixation – embedding section(1-10?m) – slides – dissolve wax –stain – mount slides section frozenly –160~190oC, -30~40 oC (2) Stain Direct stain by chemical dyes, Mediate stain by enzymes reaction or antibody reaction, other agents e.g Biotin/avidin (3)Autoradiograhy To localize radioisotopes within section of cells or tissues labelled or incorporated that have been immobilized on a slide or EM grid. Tracer isotopes: numbers of protons are same, numbers of nertrons are different The type of radiotion: ? particle—24He, ? particle—electron ? radiation—electromagnetic radiation or photons the energy of the radiation ( million eV) or path length, 3H or 14C the shor
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