1.2基因工程的基本操作程序2010.3课件.pptVIP

(一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 思考:为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗? 建构基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是唯一方法。如果所需的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得；也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得。 如果目的基因的 序列部分或全部不知；或想从一种生物体内获取许多基因，或想得到一种生物的全基因组序列，往往需要建构基因库。 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： * * 1.2 基因工程的基本操作程序 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的方法有哪些途径? （1）从已有的物种分离出来 （2）人工的方法合成 请阅读P9第一和二两段 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 1.基因文库 基因组文库与部分基因文库的关系 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 从基因文库中获取目的基因 根据目的基因的有关信息，随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使知表达。 (二)利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制_____________的核酸合成技术 ③条件：_________________________、 _______________、___________ 、 ___________.前提条件： ②原理：______________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 选修3 P10 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 一段已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 一段已知基因的核苷酸序列 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 d、多次重复 DNA合成仪器 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基