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【毕业论文】实验十微生物的生理生化反应(二).ppt
实验十 微生物的生理生化反应(二) vp试验 甲基红试验 淀粉水解试验 一、目的要求 1.了解细菌的一般生化反应; 2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。 二、基本原理 1.伏一普(Voges-proskauer)二氏反应,即V·P反应 2.甲基红试验(M·R试验) 3.淀粉水解试验 1.伏一普(Voges-proskauer)二氏反应,即V·P反应 ?某些菌生长于葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,而丙酮酸又可缩合、脱羧而转化成乙酰甲基甲醇,如加入强碱液,即与空气中的氧起作用产生二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的含胍基成分作用生成红色化合物,称阳性反应,没有红色化合物产生则称阴性反应。 2.甲基红试验(M·R试验) 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能产生大量的酸,使pH降低至4~5,它先产生丙酮酸,丙酮酸再被分解成甲酸、乙酸、乳酸等。酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色而指示(有效pH范围为4.2~6.3)。细菌分解葡萄糖产酸,则培养液由原来的桔黄色,变为红色,即为甲基红反应。 3.淀粉水解试验 某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶(胞外酶),使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖,再被细菌吸收利用。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。 三、材料? 菌种:大肠杆菌;枯草杆菌;自己分离的大肠杆菌。 葡萄糖蛋白胨水培养基;淀粉培养基; 试剂:碘液;甲基红试剂;V·P试剂. ?四,操作步骤: 1.伏一普(Voges-proskauer)二氏反应,即V·P反应 (1)取葡萄糖蛋白胨水培养基四支,分别接种大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,留一支作空白对照,并在试管上注明菌名和组别。置37℃培养24小时。 (2)培养后取出,按书123页上的要求加试剂后,放置37℃温室30分钟,呈红色者为阳性,不呈红色者为阴性。 ?2.甲基红试验(M·R试验) (1)取葡萄糖蛋白胨水培养基四支,一支接种大肠杆菌,第二支接自己分离的大肠杆菌,第三支接枯草杆菌,第四支不接种,作空白对照。在各试管上标明菌名和组别,置37℃培养48小时。(2)培养后取出,沿管壁加入甲基红指示剂3~4滴上层呈红色者为阳性。 ?3.淀粉水解试验 (1)淀粉培养基在水浴中融化后,冷至50℃,以无菌操作制成平板。用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种(或点种),另取少量大肠杆菌菌在平板的另一边接种,在各培养皿底部标明菌名和组别。置37℃温箱中培养16~20小时。 (2)观察结果:打开皿盖,滴加少量碘液于培养基上,轻轻旋转培养皿,使碘液均匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色透明圈,说明淀粉被水解。透明圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小。 五、结果与思考题 1,将实验结果填于p123表中 “+”表示阳性反应;“-”表示阴性反应。 * * *
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