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专题3 植物组织培养技术 课题1 菊花的组织培养
【学习目标】
1.熟记植物组织培养的基本原理。
2.小组合作学习植物组织培养的基本技术。
3.激情投入,全力以赴,进行菊花或其他植物的组织培养。
【重点难点】
重点: 植物组织培养过程中使用的无菌技术。
难点:植物组织培养过程中使用的无菌技术。
【预习案】
任务一. 植物组织培养的相关概念和基本过程
1.植物组织培养的相关概念
(1)细胞分化:植物的个体发育过程中,细胞在__________、__________和__________上都会出现稳定性的差异,形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因__________的结果。
(2)细胞的全能性: __________的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。
(3)愈伤组织:由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形成的组织,就叫愈伤组织,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种__________的呈无定形状态的__________。
(4)脱分化:由__________的植物组织或细胞产生__________的过程,称为脱分化,又叫去分化。
(5)再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成__________,这个过程叫做再分化。
(6)外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。
2.植物组织培养的基本过程
移植——→试管苗———→完整的植物体
任务二.影响植物组织培养的因素
1.内部因素:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大。同种植物材料,__________,__________等也会影响实验结果。菊花的组织培养,一般选择__________的茎上部新萌生的侧枝。
2.外部因素:
(1)营养条件
常用的是__________ 培养基,其主要成分包括:__________,如_______________________;__________ ,如_________________________ ;_________ 等。
(2)植物激素
植物激素中__________ 和__________ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。____________________、____________________ 以及__________等,都会影响实验结果。
(3)环境因素
__________ 、__________ 、 __________等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养,一般PH控制在 __________ ;温度控制在 __________ ;每天用日光灯照射__________小时。
任务三. 实验操作过程
1.制备MS固体培养基
实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备
(1)配制各种母液。
配制母液时,大量元素浓缩__________ ,微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时,需要根据各种母液的浓缩倍数,计算用量。
(2)配制培养基。
配制1LMS培养基时,将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水,加热熔化,然后加入蔗糖30g,依次加入母液,定容至1000mL。__________,然后分装到锥形瓶中,每瓶分装__________。
(3)灭菌。高压蒸汽灭菌
2.外植体消毒
选取菊花茎段时,要取 ____________________。
无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料(外植体)的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时,一方面要考虑_______________;另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料,甚至不同器官要区别对待。一般情况下,细菌污染可能是由接种人员造成的,真菌污染可能是_________灭菌不当。
过程:
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2~3次,持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1~2min→无菌水中至少清洗3次
3.接种
接种前,用体积分数70%的酒精将工作台擦拭,然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行,并且每次使用器械后,都要用火焰灼烧灭菌。
4.培养
接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期消毒,温度控制在18-22℃,并且每天用日光灯光照12h。
5.移栽
6.栽培
附:一般来说,容易进行__________的植物,也容易进行组织培养。
【探究案】
探究点一
1.你能说出各种营养物质的作用吗?同专题中微生物培养基的配方相
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