2010年4月实验室微生物培训－饲料中沙门氏菌的检验.pptVIP

饲料的微生物学检验项目：沙门氏菌检测 二0一0年四月 主要内容 饲料卫生标准介绍 沙门氏菌微生物学特性 沙门氏菌检验标准 饲料中沙门氏菌检验 沙门氏菌的图片 一、GB 13078-2001饲料卫生标准 2001-10-01实施 为强制性标准，“本标 准 所 有技术内容均为强制性”。饲料企业应该具备按标准对其产品进行质量控制的能力；应具备与标准相适应的检测能力。 规定了砷、铅、镉、氟、汞、氰化物等共17个卫生项目的指标。 微生物项目包括：霉菌、沙门氏杆菌、细菌总数。 GB 13078-2001 沙门氏菌卫生指标：不得检出。 二、沙门氏菌属简介 1880年E. Berth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取Salmon氏之名为本菌属之名。 沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现2000多个血清型，我国已发现血清型近200个。 二、沙门氏菌属—生物学特性 形态特征： 革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。 培养特性： 沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10～42 ℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。 营养琼脂平板上：35～37℃培养18~24h，其菌落大小一般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上：中等大小的灰白色菌落。 沙门氏菌属：生化特性 绝大多数沙门氏菌有规律的发酵葡萄糖产酸产气，但也有不产气者，不发酵蔗糖和侧金盏花醇、不产生吲哚、不分解尿素。 生化鉴定的依据 沙门氏菌属的抗原 菌体抗原（O抗原） 表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原 鞭毛抗原（H抗原） 纤毛抗原 血清学鉴定的依据 沙门氏菌属——致病性 三、沙门氏菌检验标准 GB/T 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 GB 13091-2002 饲料中沙门氏菌的检测方法 GB/T 22429-2008 食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌 O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验 酶联免疫法 SN/T 1059.6-2008 进出口食品中沙门氏菌属检测方法 垂直膜过滤法 SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法 四、饲料中沙门氏菌的检验 检验标准： GB 13091-2002 饲料中沙门氏菌的检测方法 判定标准： GB 13078-2001 饲料卫生标准 检验基本步骤 1.前增菌-第一步使样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5.血清学鉴定：血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。 实验仪器和材料 1　冰箱：0℃～4℃。 2　恒温培养箱：36℃±1℃。 4　高压灭菌器。 5 超净工作台。 6 均质器或灭菌乳钵。 7 架盘药物天平：0g～500g,精确度0.5g。 8 灭菌广口瓶：500mL。 9 灭菌锥形瓶：500mL、250mL。 10 灭菌吸管：10mL（具0.1 mL刻度）。 11 天菌培养皿：90mm。 12 灭菌小试管：内径3mm×50mm。 13 灭菌毛细管。 样品处理 样品类型：饲料，饲料添加剂 样品量：四分法缩分，由2Kg缩分至250g。 采样依据：GB/T 14699.1 饲料采样方法 检验流程图 操作步骤 1、前增菌（非选择性增菌 以无菌操作取25g（mL），加在装有225mL缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内。8000～ 10000r/min均质1min。于36℃±1℃培养16～20h。 2、选择性增菌 移取上述培养物0.1mL，转种于10mL氯化镁孔雀绿增菌液，于42℃培养18h～ 24h。 同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36℃±1℃培养24h或48h。 操作步骤 3、分离培养 氯化镁孔雀绿增菌液24h后：分别划线1个或2个酚红煌绿琼脂和DHL平板。