第四章 层析分离技术.pptVIP

层析分离具有如下基本特点 优点：（l）分离效率高。 （2）应用范围广。 （3）选择性强。 （4）设备简单，操作方便。 缺点：处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，工业生产上还应用较少。 层析的基本概念 固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如 吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质 （如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与 待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。 它对层析的效果起着关键的作用 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一 个方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流 动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为 展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一 定义：利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使 混合物各组分分离的方法。 吸附剂的选择 常用的吸附剂除氧化铝、硅胶和聚酞胺外，还有活性炭。 吸附剂的种类很多，而对吸附剂的选择尚无固定的法则，一般需通过小样实验来确定。 基本原理 分配柱层析是利用被分离物质中各成分在两种不相混溶的液体之间的分配系数不同而使混合物得到分离。 固定在柱内的液体叫固定相，用作冲洗的液体叫流动相。为了使固定相固定在柱内，需要有一种固体来吸牢它，这种固体本身不起什么分离作用，也没有吸附能力，只是用来使固定相停留在柱内，这种固体叫载体。 进行分离时先将含有固定相的载体装在柱内，加少量被分离的溶液后，用适当溶剂进行洗脱。在洗脱过程中，流动相与固定相发生接触，由于样品中各成分在两相之间的分布不同，因此向下移动的速度不同，容易溶于流动相中的成分移动快，而在固定相中溶解度大的成分移动就慢，因此得到分离。 分配柱层析的载体 （一）硅胶 吸水量为50%时仍为粉末状，当其吸水量在17%以上时，硅胶就失去其吸附作用，作为载体使用，此时硅胶层析则为分配层析。 （二）硅藻土 具有微孔结构，不具吸附作用，是现在使用最多的载体。其处理和装柱方法基本同硅胶相似 。 （三）纤维素 分配柱层析的固定相与展开剂 （一）固定相 常用的固定相有水、各种缓冲溶液、酸的水溶液、甲酰胺、丙二醇以及为水所饱和的有机溶剂等。有时也采用“反相层析法”，即用有机溶剂为固定相，而以水或水溶液或与水混合的有机溶剂为流动相。 （二）展开剂 流动相一般用为水所饱和的有机溶剂或水一有机溶剂互溶的混合液，一般常用的流动相溶剂有石油醚、醇类、酮类、酯类、卤代烷类、苯类等，或它们的混合物。反相层析法常用的流动相，则为正相层析法中的固定相，如水、各种水溶液（包括酸、碱、盐与缓冲液）、低级醇类等。 分配柱层析的基本操作 （一）装柱 装柱前，将固定相与载体混合，如果用硅胶、纤维素等载体时，可以直加固定相直接混合，用硅藻土为载体先把硅藻土放在大量流动相液体中，在不断搅拌下，逐渐加入固定相。 （二）加样 1、将被分离物配成浓溶液，用吸管轻轻沿管壁加到含固定相载体的上端，然后加流动相洗脱； 2、被分离物溶液用少量含固定相的载体吸收，溶剂挥发后，加在层析管载体的上端，然后加流动相洗脱； 3、用一块比管径略小的圆形滤纸吸附被分离物溶液，溶剂挥发后，放在载体上，然后加流动相洗脱。 分配柱层析的特点与应用 （一）特点： 分配柱层析具有载体来源容易、分离成本低、流速快等特点,适用于分离极性比较大、在有机溶剂中溶解度小的成分，或极性很相似的成分。 （二）应用： 分配柱层析多用于分离亲水性的成分，如苷类、糖及氨基酸类。 3.1 原理与特点 （一）离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。（二）离子交换剂的电荷基团 根据与基质共价结合的电荷基团的性质，可以将离子交换剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。（三）交换容量 交换容量是指离子交换剂能提供交换离子的量，它反映离子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。通常所说的离子交换剂的交换容量是指离子交换剂所能提供交换离子的总量，又称为总交换容量，它只和离子交换剂本身的性质有关。 （四）离子交换剂的选择、处理和保存 4.1 离子交换剂的选择 取决于被分