植酸酶高效生产菌株74-＃-的改良.pdfVIP

摘 要 植酸酶是一种可以水解植酸的磷酸酶类，能够分解饲料中的植酸为动物可利用的无机磷和肌 醇，已经在动物营养，人类营养以及酶法合成低磷酸肌醇方面有了很广的应用范围。但目前，提 高植酸酶生产菌株的单位表达量，进一步降低其生产成本仍然是最重要的植酸酶产业目标之一。 本研究以目前植酸酶表达量最高的实际生产菌株74”为材料，通过共表达二硫键异构酶、透明 颤菌血红蛋白，增加基冈拷贝数等方法，以期进一步提高其表达量，降低生产成本。本研究也对 毕赤酵母表面展示植酸酶进行了尝试。 根据己发表的毕赤酵母来源二硫键异构酶(PDI)基因序列，克隆获得PDI编码基因，并构建了 化。从600个转化子中筛选到3个酶活性更高的重组子，其中酶活性最高的49”菌株其活性是原有 菌株748酶活性的120％，在5L发酵罐中表达活性达到16，582U／mL。在此基础上，用经密码子优 菌株49”为受体，筛选重组子后得到多拷贝的植酸酶菌株79。，酶活性达到17，434U／mL，与共表 达PDI蛋白的49”菌株相比，提高了10％；与生产菌株748相比，提高了34％。 根据已发表的树干毕赤酵母基因组序列克隆了低氧启动子PsADH2promoter序列，并根据已 发表的透明颤菌血红蛋白序列，按照毕赤酵母密码子偏爱性对