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关于大白鼠提睾肌缺血再灌注后血管内皮细胞的凋亡基因表达 【关键词】睾丸 关键词: 睾丸;内皮，血管;细胞;脱噬作用;缺血再灌注 摘 要:目的研究大白鼠提睾肌缺血再灌后血管内皮细胞的凋亡基因表达. 方法 以免疫组织化学 SP 法对大白鼠提睾肌缺血再灌注后血管内皮细胞 Bcl-2， Bax 及p53 的表达进行观察. 结果 大白鼠提睾肌缺血再灌注的血管内皮细胞 Bax 及p53 阳性细胞率（分别为83%和87%）明显高于Bcl-2 和对照组（分别为 34%和7%），（P0.01），再灌注6h 阳性细胞最多. 结论 大白鼠提睾肌缺血 再灌注可引起血管内皮细胞凋亡，并可能在微循环障碍中起重要作用. Keywords:testis;endothelium，vascular;cells;apoptosis;reperfusion Abstract:AIM To study apoptotic gene expression of the endothelial cells in cremaster ischemia-reperfusion of the rat.METHODS Expression of Bcl-2，Bax and P53in endothelial cells of cremaster ischemia-reperfusion of the rat was investi-gated by means of immunohistochemical SP method.RE┐SULTS Positive expression rate of Bax （83%）and P53 （87%）was much higher than that of Bcl-2 （34%） and con-trol （7%，P0.01）and reached the hightest level6h after reperfusion.CONCLUSION Ischemia-reperfusion of the cremaster could induce the apoptosis of the endothelial cells and might play an important role in microcirculation disorder. 0 引言 在血管创伤、组织或器官移植中，因术后微循环障碍而使手术失败者时常 发生.术后微循环障碍的产生因素目前认为是血管内皮细胞损伤及其引发的一系 列病理生理改变，其中包括血小板和白细胞的凝集，产生微血栓、释放促凝因 子及缩血管因子等.造成血管内皮细胞损伤的因素很多，除内毒素、自由基、外 科创伤、Ca2+ 超载等外，细胞凋亡已开始受到许多学者的关注，认为异常的细 胞凋亡也可引起血管内皮细胞的损伤及死亡［1-3］ .在外科创伤修复、组织和 器官移植手术中，血流的暂时阻断和血管吻合后的再灌注是否会引起血管内皮 细胞的损伤和凋亡，参与术后微循环障碍，此方面还未见报道.因此，我们用大 白鼠提睾肌微循环缺血再灌注模型，研究了细胞凋亡相关基因bcl-2，bax 及 p53 在血管内皮细胞的表达，以探讨缺血再灌注后的血管内皮细胞的凋亡改变 及其对微循环的影响和作用. 1 材料和方法 1.1 动物模型 成年雄性SD 大鼠35 只，体质量（250±30）g，由本校实验 动物中心标准饲养室提供.其中30 只平均分为再灌注0.5h，1h 和6h3 个实验组， 另5 只动物用做对照实验.实验组动物以10g ・L-1 ，ip 戊巴比妥钠溶液麻醉后， 切开一侧腹股沟区皮肤，显露提睾肌，从提睾肌外侧分离至其根部，寻找发自 髂动脉的腹壁阴动脉及所有到提睾肌之小动脉，穿粗线结扎完全阻断血流0.5h 后，松开结扎线，恢复血流，分别于再灌注后0.5h，1h 及6h 经主动脉插管灌 流固定，依次灌入9g ・L-1 生理盐水150mL 和40g ・L-1 多聚甲醛250mL，将 同侧提睾肌整体取下，置固定液后固定备用.对照组动物除不做血管阻断外，其 他操作同实验组. 1.2 试剂 Bcl-2，Bax 及p53 鼠抗单克隆抗体是MBI 公司产品.链霉菌抗生 素―过氧化酶免疫组织化学染色超敏试剂盒购自福州迈新公司. 1.3 方法 与血管纵轴垂直切取提睾肌组织块、脱水、包埋及石蜡切片，片 厚5μ m.切片经脱蜡和水化后，依次以双氧水阻断剂和正常血清室温孵育 10min， Bcl-2，Bax （1 ∶40）和p53 （1 ∶100）单克隆抗体室温孵育60min，