细胞培养及在医学研究上的－新.pptVIP

一、细胞（组织）培养发展简史  细胞培养是指取出生物有机体的某一部分组织，在体外条件下，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定培养条件下，使其能够生存和生长，并进行生化代谢维持其结构和功能的方法。 1）细胞培养： 把取得的组织用机械或消化的方法分散成单个细胞悬液进行培养、生长。 2）组织培养： 把活体的一小片组织置于底物上孵育，细胞自周围移出并生长。3）器官培养： 将活体中器官或一部分器官取出，使之在体外生存、生长并同时保持其一定的结构和功能特征。   Harrison参考前人经验，采用青蛙淋巴液做培养基，培养蛙胚神经组织发现，从神经细胞长出神经纤维，解决了当时长期争论的神经纤维来源问题，对医学和生物学产生很大震动。 Carrel是一个外科医生，采用血浆包埋组织块外加胎汁的培养方法（悬滴培养法），将鸡胚心肌组织培养长达数年之久，从而完善了经典的悬滴培养法。 2）1923 Carrel  卡氏瓶培养法3）1948 Sanford  创建了单细胞分离培养法（建立克隆细胞株）4）1951 Pomerat  设计了灌流小空，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于显微摄影和细胞代谢的研究。5）1957 Dulbecco  单层细胞培养法（普遍技术，cell line） 4．细胞株的建立 1943年Earle首先从小鼠皮下组织成纤维细胞建立了L 细胞株能够长期生长培养，给研究工作带来很大方便，从此相继建立了许多细胞株。 较早建立的细胞株 株名 来源 建立者 年代 L 小鼠皮下组织 Earle 1943Hela 人宫颈癌 Gey 1952KB 人口腔上皮癌 Eagle 1954CHO 中国仓鼠卵巢成纤维C Puck 1957NIH3T3 小鼠胚胎成纤维C Hartley 1970Friend 小鼠红白血病 Friend 1974HL60 人髓性白血病 Collins 1977COS-1 猴肾成纤维C Gluzman 1981 5．细胞培养工作的要求***1）需明白各种操作的基本原理。 2）要有判定细胞生长好坏和是否发生污染的能力。 3）熟悉体外培养细胞的生存条件、细胞的生物学性状和与此有关的基本理论知识。 1）各种用液（培养液，胰酶，抗 菌素、Hanks液、NaHCO3）均应由专人配制，专人负责，并保证按规程行事。  2）制备浓度精确，灭菌可靠； 3）标签注明名称、浓度、消毒日期； 4）培养用品与非培养用品严格分开； 5）消毒与未消毒的用品严格分开存 放。 *** 一切为了防止污染 二、细胞培养类型和方法 （一）培养细胞生长方式1．贴附型： 必须贴附于底物（支持物）才能生长的细胞称为贴附型，大多数培养细胞呈此形式生长。可分为成纤维细胞型和上皮细胞型。 1）成纤维细胞型： 起源于中胚层的组织细胞，如纤维结缔组织、平滑肌、心肌、血管内皮细胞等。形态特点：胞体呈梭型或不规则型，具有长短不等数个突起，核为卵圆形位于胞质中央，其生长特点排列为旋涡状、放射状或栅栏状。 2）上皮细胞型： 起源于内、外胚层的细胞，如皮肤表皮及其衍生物、乳腺、肝、肺泡、消化道上皮等。形态特点：扁平多角型、中有圆形核，细胞紧密相连成单层膜，其生长特点为细胞之间紧密相靠，互相衔接，具有连接成片的能力。 3）游走型细胞： 在支持物上散在生长，一般不连接成片。4）多形型细胞： 神经组织的细胞(形态难以确定）。  2．悬浮型： 在体外培养时呈悬浮状生长的细胞，如某些肿瘤细胞和一些取自血、肝或骨髓培养的细胞。形态特点：胞体为圆形，优点是细胞生存空间大，大量繁殖，传代方便，易于收获。 （二）细胞培养类型、 技术 1．原代培养（Primary Culture） 也叫初代培养，是从生物机体或组织取出组织块或细胞后直接进行培养，与体内环境比较接近，细胞移行性小，并能在短期内可以获得大量细胞，一般适于短期培养。 缺点：往往混有多种细胞，不适用 于探讨某一种