微生物制药工艺培训.pptVIP

第一步 菌种的生产与保藏 一、菌种的制备过程 二、菌种的质量控制 三、菌种的保藏 生产菌种的制备 　　　 两个过程：在固体培养基上生产大量孢子的孢子制备过程和在液体培养基上生产大量菌丝的种子制备过程。 放线菌孢子的制备 工艺过程 注意事项 限制碳源(约1%)和氮源(不超过0.5%)。 培养温度多为28 ℃ ，少数为37 ℃ ，培养时间为5~14天。 采用孢子进罐：工艺简单，批间差异小，便于控制孢子质量；采用菌丝进罐：可缩短种子罐内的培养时间(尤适生长缓慢的菌种)。 霉菌孢子的制备 　 注意事项 天然农产品因具有独特的营养成分和较大表面积而适合作霉菌的培养基。 培养温度多为25~28 ℃ ，培养时间为4~14天。 细菌孢子的制备 　 注意事项 适合采用碳源限量而氮源丰富的培养基 培养温度多为37 ℃ ，少数为28 ℃ ，培养时 间细菌菌体为1~2天，产芽孢的细菌为5~10天。 摇瓶种子制备 孢子发芽或菌丝繁殖缓慢的菌种需将孢子经摇瓶培养成菌丝后再进入种子罐，摇瓶具有浓缩种子罐的作用，其培养基配方和培养条件与种子罐相似。 种子培养基营养应丰富完全，易被菌体利用，浓度不宜过高 种子罐种子制备 孢子或摇瓶菌丝被接入体积较小的种子罐中，培养后形成的大量菌丝，这种种子称为一级种子。 把一级种子转入发酵罐中发酵，称为二极发酵。 种子罐的级数主要决定于菌种的性质、菌体的生长速度和发酵设备的合理应用。 种子罐级数减少，有利于生产过程的简化和发酵过程的控制，减少因种子生长异常而造成的发酵波动。 二、生产菌种的质量控制 培养基 培养基的原材料的产地、品种、加工方法和用量对孢子质量都有一定影响减少水质影响的方法：在蒸馏水或无盐水中加入适量无机盐，供配制培养基使用斜面培养基的主要材料经化学分析和摇瓶发酵试验合格后才能用于孢子培养基应保证培养基灭菌后的质量水份适中有利于孢子生长，因此斜面培养基使用前应于一定温度下放置一定时间，使斜面无冷凝水。 两条经验： 供生产用的孢子培养基或作为沙土孢子或传代所用的培养基宜用单一氮源，以保持正常菌落的优势。 作为选种或分离用的平板培养基，则需采用较复杂的有机氮源，目的是便于选择特殊代谢菌落。 二、生产菌种的质量控制 温度和湿度 提高培养温度，可加速菌体代谢，缩短培养时间，但不可超过菌体敏感温度相对湿度对孢子形成的速度、数量和质量均有影响，北40～45%方南方35～42%。 培养时间和冷藏时间 孢子培养时间 孢子培养时间应控制在孢子量多、孢子成熟、发酵产量正常的阶段终止培养一般，衰老的孢子核物质趋于分化，因此不如年轻的孢子，但过于年轻的孢子经不起冷藏。 孢子冷藏时间 　　原则：宜短不宜长　 种子制备的过程（不同的划分方式） 三、菌种的保藏 目的：确保微生物生产性能稳定、不染菌、不死亡等。 原理：“休眠”挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢等） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件（如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸碱中和剂等） 工业微生物菌种保藏技术 　 (1) 冷冻干燥或真空干燥保藏； (2) 超低温或在液氮中冷冻保藏； (3)? 转接培养或斜面传代保藏； (4) 土壤或陶瓷珠等载体于燥保藏。 种子制备设备 灭菌柜（IQ/OQ/PQ，装载模式）； 摇床间的设计（温度控制及均一性）； 接种100级无菌要求； 生化培养柜（PQ）； 菌种保存设备（防止意外发生，备用） 其它辅助设备 第二步 发酵 一、培养基灭菌 培养基配制（调pH、加料顺序，计量）； 炭源氮源分消； 培养基灭菌、移种管道灭菌； 灭菌验证； 分批灭菌与连消； 灭菌工艺不是一成不变的； 季节影响体积。 一、培养基灭菌 培养基中的颗粒物质大，灭菌困难，反之，灭菌容易。一般说来，含有颗粒对培养基灭菌影响不大，但在培养基混有较大颗粒，特别是存在凝结成团的胶体时，会影响灭菌效果，必须过滤除去； 培养基的成分中，油脂、糖类、蛋白质都是传热的不良介质，会增加微生物的耐热性，使灭菌困难。 浓度较高的培养基相对需要较高温度和较长时间灭菌。 高浓度的盐类，色素则削弱其耐热性，故较易灭菌。 二、染菌防治 发酵染菌能给生产带来严重危害，防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容。尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。 所谓“杂菌”， 是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。 几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。染菌的结果，轻者影响产量或产品质量，重者可能导致倒罐，甚至停产。 国外一抗生素发酵染菌原因的分析 国内一制药厂发酵染菌原因的分析 二、染菌防治 四、发酵设备