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培养细胞的生物学特点余莉安徽医科大学微生物教研室 内 容 提 要 培养细胞的生长方式及类型 培养细胞的生物学特点 培养细胞生长过程 培养细胞生长状况的观察 一、培养细胞的生长方式及类型 培养细胞的生长方式 贴壁生长型细胞 悬浮生长型细胞 ? 特点：与体内成纤维细胞形态相似,胞体梭型或不规则三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出2～3个长短不同的突起。细胞在生长时呈放射状,漩涡或火焰状走行。 2、上皮细胞型(epithlium cell type) 体外培养中的上皮型细胞泛指那些外形上类似上皮细胞,大体为扁平样的多种培养细胞。 这类培养细胞的主要形态学特征是:扁平,形态较为规整,细胞大致呈多角形,胞体正中央处有扁圆的细胞核;细胞之间相互衔接或呈镶嵌状紧密排列;当细胞紧密排列时,细胞可为六角形或多角形,因为相互拥挤而呈现“铺路石样”,局部可构成单层的上皮样“膜片组织”。但上皮型细胞并不完全等于动物体内上皮组织的细胞。 起源于内胚层与外胚层的细胞,体外培养时都可能呈现上皮型。 3、游走型细胞(wandering cell type) 特点：在支持物上散在生长,不连接成片,胞质伸出伪足或突起呈活跃的游走或变形运动,速度快不规则, 密度大连接成片呈多角形不易与其他类型的细胞 区别。 4、多形型细胞(polymorphic cell type) 特点： 无规律的形态，如神经细胞。 （二）悬浮生长型细胞(suspended cell type) 特点： 不贴附在支持物生长，胞体圆形，在培养液中生长空间大，可长时间的生长，繁殖旺盛便于做细胞代谢研究。S180肉瘤、血液里的白细胞、K562、 HL－60。 其主要形态学特点是胞体始终为球形。能以悬浮状态生长的细胞,密度一般都可以较大,故培养的效率高。许多大规模培养方式即以悬浮状态进行(这里仅指培养的细胞悬浮,不指细胞载体悬浮的方式)。以这种方式培养细胞时,转换培养液、补加培养液以及收获细胞都比较容易。不足之处是不方便观察。 体外培养物的生物学特点 总的： 与体内仍有相似-- 体外培养的细胞仍存在细胞和细胞、 细胞和基质的相互关系 但有不同 相对孤立、相对单一 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显 培养细胞的主要生物学特点 1.去分化2. 贴壁和铺展3. 接触抑制和密度依赖性生长抑制 去分化 培养细胞分化状态的变化 去分化(脱分化):各种分化细胞，逐渐失去各自的形态与功能“个性”，表现出某种趋同性 有2点 1.但,去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态如:高度分化的神经细胞和心肌细胞 已经丧失的增生活性不可能恢复 但已经具备的生物电活动特性 不会完全失去 2. 可重新表现出分化特点 如：把表皮细胞放在气液界面上培养，可分化成 含大量角蛋白丝的角质细胞 内皮细胞--但，这种能力会随着培养时间延长  逐渐丧失总之，体外培养,使细胞 结构与功能上的“可塑性”增大  贴附和铺展 贴附(粘附)和附着 粘附于固相表面是锚定依赖性细胞生命活动的基本要求细胞被接种到培养器皿内以后首先要发生粘附(adherence)， 是细胞培养以后能否成功的第一步.细胞悬液后 耽搁得越久，越容易发生退化提供什么样的生长表面 是细胞能否成功粘附的主要因素。 不同细胞的粘附能力不同 如巨噬细胞、成纤维细胞等粘附能力强 能在数分钟至数十分钟内粘附到固相表面 如神经元细胞、羊水细胞，粘附能力弱 需要数小时乃至更长的时间才能粘附到固相表面 粘附能力强的细胞--- 粘附能力弱的细胞--- 可利用此特点（粘附：快、牢；慢、弱） 分离、纯化细胞 细胞形态因是否贴附于底物而不同悬浮的细胞: 基本圆形粘附和贴壁的细胞: 扁平圆形 相差显微镜 “亮圈” 很快过渡-- 贴附过程 ：3步 贴附因子粘附 细胞开始附着 细胞进一步牢固附着—伸展 各种细胞不同 如接种30’后…第二瓶30’… (附着最强)巨噬细胞一成纤维细胞 ——上皮细胞——血细胞(最弱) 生物因素 血清、培养液中的促附着因子 机械，物理等其他因素因素 离心：促进附着