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怀山药组织培养 云南农业大学植物保护学院植物保护专曹政 概述 外植体的制取 初代培养 继代培养 生根培养 移栽管理 快繁工作的计划(Y= ) 怀山药组织培养概念：指在无菌条件下，将怀山药的任何器官、组织、细胞或原生质体，在人工配置的培养基上培养，并给予适当的培养条件使其生长、分化形成完整再生植株的过程。 怀山药组织培养的理论依据：植物细胞的全能性。 外植体的制取 将怀山药在室内催芽生长，嫩茎为外植体，先用75%的酒精浸泡15s,再用饱和漂北粉溶液消毒10~15min，最后再用无菌水冲洗3~4次，置于超净工作台上在解剖镜下剥取茎尖（约0.1~0.5mm)置于茎尖诱导培养基中培养。 初代培养 根据培养过程，将从怀山药上分离下来的部分进行第一次培养，称为初代培养。 茎尖诱导培养基： MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA3%蔗糖 6g/L琼脂 ph5.8~6.0 继代培养 初代培养后将培养物转移到新的培养基上继续培养则统称为继代培养。 丛生芽的分化及继代培养基： MS+1.0mg/L6-BA+2.0mg/L KT+3%蔗糖6g/L琼脂 ph5.8~6.0 怀山药组织培养的优点 取材少，陪养材料经济 人为控制培养条件，不受自然条件影响 生长周期短，繁殖率高 管理方便，利于自动化控制 怀山药组织培养的意义 理论意义：细胞脱分化与再分化的规律与机理；细胞组织和器官的生长发育规律；各种营养物质植物生长物质以及外界条件对器官形态建成的影响；试管苗生长发育过程中生理生化变化规律；有效药用成分生物合成的机理及途径等。 实践意义：获得脱毒苗；优良品种或脱毒苗的快速繁殖；新品种培育；物质资源的立体保存；细胞培养与有效药用成分的生产。 超净工作台 无菌接种箱 高压蒸汽灭菌锅 怀山药优良品种 ↓预先热处理（35~39℃,3~8周） 茎尖培养 ↓热处理（35~38℃,4~6周） 再生植株 ↓ 无性繁殖系 种性鉴定←↓→病毒鉴定（试管苗） 无病毒原种生产→移栽（产量、品质对比实验） ↙↘ 原种生产 扩大繁殖生产种 ↓ 商品种（ 或提供给农户） 生根培养 将生长至2.0cm的无菌试管苗转入生根培养基中，经过7~10d的培养便开始生根，继续培养20d左右当试管苗长至4~5cm时即可以进行移栽。 生根培养基：MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L IBA+0.5%活性炭+3%蔗糖 6mg/L琼脂 ph5.8~6.0 移栽 试管苗移栽成活率低的原因：试管苗的根无根毛或很少；试管苗的光合作用能力极低； 一般移栽试管苗时，开始时打开瓶口，逐渐降低湿度，并逐渐增强光照，进行驯化，使新叶逐渐形成蜡质，产生表皮毛，降低气孔口开度，逐渐恢复气孔功能，减少水分三散失，促进新根发生，以适应环境。 预算 六月初 500株脱毒怀山药试管苗（原品种） 繁殖系数为5 ↓ 七月上旬 2500株苗=12500个切断 ↓ 八月中旬 12500株苗 ↙↘ 10000株苗 2500株苗=12500个切断