仪器分析高效液相色谱法PPT精选.ppt

检测器 高压输液泵 高压输液泵 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统 * 1．高压泵 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统，其中高压输液泵是核心部件。 常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。 * 高压泵 高压输液泵是液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。 输液泵的稳定性直接关系到分析结果的重复性和准确性。 * 2.梯度洗脱装置 梯度淋洗（梯度洗脱）：是在分离过程中逐渐改变流动相的组成，增加洗脱能力的一种方法。主要是通过梯度装置将两种（或更多）极性不同的溶剂在分离过程中按一定程序连续改变流动相中溶剂的的配比和极性。类似于气相色谱程序升温的作用。 优点：通过改变极性来改变分离组分的分离因素，以提高分离效果，增加分辨能力，改善峰形，同时可缩短分离时间。 * 通过两个输液泵流速的变化，改变流动相的洗脱能力，其作用与气相色谱的程序升温类似。 A B A B C C * 3．进样装置 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。 进样装置： 注射器进样； 高压定量进样阀； * 通常采用六通阀进样： 色谱柱 色谱柱 泵 泵 1 2 进样 * 4、分离系统——色谱柱 色谱柱包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜，内衬光滑的聚合材料。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备柱内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离柱的性能不受影响。 * 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 * 5．检测器 在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质型检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电导检测器 * （1）紫外-可见检测器 光源 检测室 光栅 二极管阵列检测器 * * 右图表示用二元梯度来分离几种氨基甲酸酯类杀虫剂，采用15cm的C18柱，溶剂组成：CH3CN-H2O， 15分钟内从10%（V/V）随时间改变至50% * * * 农药的分析 * 3-7 分离类型选择 choice of separation types * 3-8 HPLC的应用 在食品研究中的分析应用 食品中的天然成分 碳水化合物 类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇 脂肪酸和有机酸 蛋白、肽、氨基酸 食品添加剂 酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂 抗氧化剂、防腐剂 颜料和染料（色素〕 维生素 污染物 霉菌（黄曲霉毒素〕 农药和兽药残留 多环芳烃（PAHS〕和亚硝酸 * HPLC的应用 在兽药研究中分析应用 在医药研究中分析应用 药物分析有USP、BP、CP等标准 常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。 甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。 抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。 中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮甙等)、萜类 手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂D-青霉胺毒性小，L-异构体毒性很强) 医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。 * HPLC 的应用 在生物化学和生物工程中的应用 氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究 核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 生物胺的分析研究（儿茶酚胺类) 在精细化工分析中的应用 醇、醛和酮、