ABCG5 和ABCG8 在肝细胞胆固醇转运中的作用.pdfVIP

中华肝胆外科杂志2005年 IO月第 l1鲞第 1o期 旦1 ! 望!Q ! !： ! ： · 695 · 实 验 研 究 · ABCG5和 ABCG8在肝细胞 胆固醇转运 中的作用 沈振斌 秦新裕 童赛雄 锁涛 【摘要】 目的 验证 ABCG5和 ABCG8在胆固醇转运 中的作用 。方法 通过脂质体介导将含 ABCG5或 ABCG5和 ABCG8的质粒导入 7721细胞系，通过抗生素 G418、zeocin筛选获得新的细胞 系 7721一G5与 7721一DG。用 RT—PCR及Westernblot等方法证明细胞系 7721一G5与7721一DG中分别 含有 ABCG5，ABCG5和 ABCG8。7721、7721一G5、7721一DG细胞系分别用 [。HI标记 的胆 固醇、游离胆 固醇、卵磷脂、无脂血清作用使细胞 内胆 固醇饱和，随后用牛磺胆酸钠 ／卵磷脂受体系统进行胆固醇外 运实验。每 60min测定培养液中[。HI标记的胆固醇含量，计算外运的胆固醇数量。结果 研究发 现转染后含有 ABCG5和ABCG8的7721一DG细胞系胆固醇转运能力明显高于其余两株细胞系，而仅 含有 ABCG5的 7721一G5细胞系胆 固醇转运能力无明显变化 。结论 ABCG5与 ABCG8具有促进胆 固醇外运的作用 ，两者必须形成异二聚体才 能行使这种作用 。此外 ，用 myc和 HA标记后并不影 响 AB(G5和 ABCG8发挥功能 。 【关键词】 胆结石 ； 胆 固醇逆 向转运 ； ABCG5； ABCG8； 结石成因 RoleofABCG5andABCG8ineholesteroltransportSHENZhenbin，Q1NXinyu，TONGSaixiong，et 口． ongshanHospital，FudanUniversitY，Shanghai200032，P．R．China [Abstract] Objective TodeterminetheroleofABCG5andABCG8in1ivercholestero1trans— port．M ethods ThemouseABCG5cDNA aloneorABCG5andABCG8cDNA togetherweretrans— fectedinto7721cel11inethrough 1ipofectamine2000．New cel11ine7721一G5containingmouseABCG5 cDNA and7721一DG mouseconfainingABCG5andABCG8cDNA wasobtainedthroughG418andzeo— cinscreening．TheexistenceofABCG5andABCG8 wasproved bvRT—PCR andW esternblotting． The7721，772卜G5and7721一DG cellswereal1saturatedwithfreecholestero1andradioactively1abeled [。HI—cholestero1．Cholestero1effluxbeganwhenthecellswereculturedwithtaurocholatesodium／egg PCacceptors．Thealiquotsofmediumweredetectedforr。HI—cholesterolby1iquidscintillationtech— niqueevery60min．Results The7721一DGcellsshowedincreasedcholestero1effluxthanothertwokindsof cells，while7721一G5cellshad1ittlechangeincholestero1efflux．Conclusions ABCG5andABCG8function ascholestero1transportersandpromotecholestero1effluxunderthecircumstancethatthey2fotinthehet— erodimer．Meanwhile，ABCG5orABCG8taggedwithmycorHA canonlyslightlychangeitsfunction． [Keywordsl C