生物：1.2《基因工程的基本操作程序》课件001(新人教版选修3).pptVIP

cDNA文库与基因组文库的比较 利 用 PCR技术 扩增目的基因 核酸的基本单位－－核苷酸 基因表达载体的构建-----核心 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 将目的基因导入微生物细胞 由于原核生物具有一些其它生物所没有的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等，因此、早期的基因工程操作都以原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是： 1、制备感受态细胞：Ca2+处理—增大细胞壁的通透性，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态； 2、完成转化：将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 PCR扩增仪 1、基因表达载体包括哪些必需组分？ 2、将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法分别有哪些？ 3、目的基因的检测有哪些方法？ 基因表达载体的模式图 抗生素抗性基因 组成：基因表达除含有目的基因外，还需要以下元件： 启动子 终止子 标记基因 将目的基因导入受体细胞 － 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 Ca2+处理法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 植物肿瘤 DNA DNA 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 DNA 适用于 单子叶植物 基因枪法 又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法，常用的金属颗粒有钨粉粒子和金粉粒子. 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 我国科学家独创，在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。 种子植物 裸子植物 被子植物 双子叶植物 单子叶植物 : 松、柏、杉… :花生、大豆、棉花… : 水稻、小麦、玉米… 双子叶植物－网状脉 单子叶植物－平行脉 显微注射技术 是转基因动物中采用最多、最为有效的方法。基本操作程序是： 1、将含有目的基因的表达载体提纯，并使DNA浓度保持在1-3μg/ml； 2、从雌性动物体内取出卵（卵可以在体内受精，也可以在体外受精），采用显微注射仪进行显微注射； 3、再将注射了目的基因的受精卵，经胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。 * * 现代生物科技专题 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 基因工程的基本操作程序 什么叫基因？ 基因－－有遗传效应的DNA片段。 什么叫遗传效应？ 遗传效应－－ 能转录为mRNA，继而翻译为蛋白质； 能转录为核糖体RNA； 能转录为转运RNA。 基因工程的目的基因－－ 　　从供体转移到受体的基因，主要指编码蛋白质的基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 1、人工合成 2、从基因文库中获取 3、利用PCR技术扩增 目的基因的获取 目的基因的来源 从生物中直接获取 人工合成 现代获取方法： 人工合成目的基因 DNA合成仪 基因比较小，核苷酸序列已知 1、反转录法：以目的基因转录成的mRNA为模板，反转录成单链DNA再合成双链DNA。 2、直接合成法：就是以已知蛋白质的氨基酸序列为基础，推出mRNA的核苷酸序列，再推出目的基因序列，然后进行人工合成。 化学方法合成： DNA合成仪 基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (CDNA文库) 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 从基因文库中获取目的基因 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 部分基因文库 （cDNA文库） 物种间的基因交流 基因多少 基因中内含子（位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段） 基因中启动子（具有启动作用的DNA片段） 文库大小 基因组文库 cDNA文库 文库类型 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 从基因文库获取目的基因 根据目的基因的有关信息，如： 　　基因的已知核苷酸序列； 　　基因