薄层色谱与柱色谱.pptVIP

薄层层析与柱层析 ——问题探讨 黄 松 薄层层析： 固定相：硅胶（G,F）、氧化铝、纤维素、聚酰胺、硅藻土、葡聚糖凝胶。 粘合剂：CMC—Na等。 添加剂：荧光指示剂、酸碱等。 点样量：1～5μl（过多或太少） 斑点大小：5mm左右（大小） 方式：线性（上行、下行、水平等）、环形、多次等。 影响因素：相对湿度（如何控制）、温度、溶剂蒸气（是否饱和）、展距等。 展开剂： 溶剂的分类 溶剂一般分为6类： 第Ⅰ类为电子授受体溶剂：甲苯、苯、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙睛。 第Ⅱ类为质子给予体溶剂：异丙醇、正丁醇、无水乙醇、甲醇。 第Ⅲ类为强质子给予体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水。 第Ⅳ类为质子受体溶剂：三乙胺、乙醚。 第Ⅴ类为偶极作用力溶剂：1，2－二氯乙烷、二氯甲烷。 第Ⅵ类为惰性溶剂（非极性溶剂）：环己烷、正己烷、四氯化碳。 展开剂的选择一般可以从电子授受体溶剂（Ⅰ）、质子授受体溶剂（Ⅱ、Ⅳ）、偶极作用力溶剂（Ⅴ）及溶剂极性调节溶剂（Ⅲ、Ⅵ）中分别选出一种构成四元系统。 展开剂中溶剂的作用 ①展开剂中比例较大的溶剂极性相对较小，起溶解物质和基本分离的作用，一般称为底剂。 ②展开剂中比例较小的溶剂，极性较大，对被分离的物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上移动，可以增大Rf值，但不能提高分辨率，称为极性调节剂。 ③展开剂中少量酸、碱，可抑制某些酸、碱性物质或盐类的解离而产生斑点拖尾，故称之为拖尾抑制剂。 ④展开剂中加入丙酮等中等极性溶剂，可促使不相混合的溶剂混溶，并可以降低展开剂的粘性，加快展速。 选择展开剂的方法 选择展开剂的原则为“相似相溶”原则 举例： 以黄酮类化合物为例 A环和B环都是苯环结构，可以考虑选择苯及苯的衍生物；A环和B环上一般都连接有羟基，可以考虑选择无水乙醇、甲醇等极性较大的醇类；黄酮类化合物一般都呈酸性，故可以在展开剂中加入少量甲酸，可以消除极性大的成分的拖尾、防止极性小的成分斑点扩散；黄酮类化合物中一般都会有黄酮苷类成分，故可以在展开剂中加入少量水，可以防止斑点拖尾和扩散。 根据溶剂分类原则应选择甲苯－乙酸乙酯－无水乙醇－甲酸四元系统的不同比例进行展开 实例： 独脚金总黄酮薄层色谱 展开条件为：第一次展开：甲苯－氯仿－乙酸乙酯－无水乙醇－水－甲酸＝4：4：10：1.5：0.5：0.5；展距约9cm。在荧光下定位，第二次的展距应低于第一次展开时最顶端两个斑点0.5cm，然后第二次展开：乙酸乙酯－无水乙醇－水－甲酸=6：1：0.5：0.5，展开后取出晾干，用浓度为5％AlCl3显色，在日光下观察。 柱层析： 1、洗脱条件 2、伴样 3、装柱 4、洗脱 洗脱条件： 洗脱剂的确定（一般都由薄层条件来确定） 洗脱剂的选择 常压柱：洗脱条件与薄层条件相比 加压柱：洗脱条件如何确定 装柱： 干法 湿法 其他方法 柱径比（塔板数问题、空白硅胶量） 洗脱： 流速控制 收集量：影响每瓶收集量的因素 合并 重结晶（结晶条件） 单体化合物打谱前应准备的工作： 纯度检测（HPLC、UV） 熔点（可以初步确定纯度） 溶媒（氯仿、甲醇、二甲亚砜） * 点样 展开 伴样： 样品量与硅胶量比 伴样方法 适用条件及优缺点 *