精做05+血红蛋白的提取和分离-2017-2018学年高二生物人教版选修1+Word版含解析.docVIP

专题4 DNA和蛋白质技术 精做05 血红蛋白的提取和分离 1．随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”： 请回答下列有关问题： （1）样品处理中红细胞的洗涤要用__________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度的pH为7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是______________。 （2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是___________________，若要尽快达到理想的透析效果，可以__________________________（写出一种方法）。 （3）血红蛋白的纯化是通过____________法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。 （4）电泳利用了待分离样品中各种分子的_________________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。 （5）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有______种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是_____________________________________________________。 【答案】（1）生理盐水 渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破） （2）除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 （3）凝胶色谱 （4）带电性质以及分子大小、形状 （5）2 携带者具有一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质 待分离样品中各种分子的带电性质以及分子大小、形状等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离。（5）由图可知携带者有2种血红蛋白，因为携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质。 ．如图表示血红蛋白提取和分离实验的部分装置和操作方法，请回答下列问题： （1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要成分，我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，加入柠檬酸钠的目的是_____________。 （2）如图甲表示____________过程，该操作目的是去除样品中分子量（大或小）____________的杂质。 （3）如图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序____________（用序号表示）。在进行操作前，应该等样品____________，且要____________（填“打开”或“关闭”）下端出口。 （4）如图丙，a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是_________，原因是___________。 【答案】（1）防止血液凝固 （2）透析（粗分离） 分子量较小 （3） 完全进入凝胶层 关闭 （4）a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快 过程，即血红蛋白的粗分离，目的是去掉分子量较小的杂质。（3）正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是；在进行操作前，应该等样品完全进入凝胶层，且要关闭下端出口。（4）a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，所以a先从层析柱中洗脱出来。 ．红细胞内含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题： （1）血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：________、粗分离、纯化和________。 （2）实验前取新鲜的血液，切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行处理、离心后，收集血红蛋白溶液。以上所述的过程即是样品处理，它包括红细胞的洗涤、____________________、____________________。 （3）收集的血红蛋白溶液要进行粗分离，其方法是________。然后通过________将样品进一步纯化，最后经________进行纯度鉴定。 （4）下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入和洗脱示意图。请据图回答下列问题。 a．在加样品示意图中，正确的顺序是___________________。 b．用吸管加样品时，应注意正确操作，分别是______________、______________、____________。 c．待________________时，才加入缓冲溶液。 d．待