第五章 Ⅱ 离子交换层析课件.pptVIP

(3) 不同离子型交换剂的选择 为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。 强酸型和强碱型离子交换剂应分别选择H型和OH型； 弱酸型和弱碱型交换剂应分别选择Na型和Cl型。 平衡离子被置换到流动相中，它不能对样品组分有污染或破坏。 分离蛋白质时，一般不能使用H或OH型离子交换剂，因为分离过程中H或OH离子被置换出来都会改变层析柱内pH值，影响分离效果，甚至引起蛋白质的变性。 (4) 不同基质离子交换剂的选择 交换剂的基质是疏水性还是亲水性，对被分离物质的稳定性和分离效果均有影响。一般认为，在分离生命大分子物质时，选用亲水性基质的交换剂较为合适，它们对被分离物质的吸附和洗脱都比较温和，活性不易破坏。 2、缓冲液的选择 选用的起始缓冲液，其pH值和离子强度等要么能使样品中有效成分与离子交换剂结合，而不能使样品中杂质与离子交换剂结合，pH值一般比有效成分的pI值高一个单位或低一个单位，就能把有效成分和杂质分开。或者选择缓冲液的离子强度和pH值，使杂质和离子交换剂结合牢固，有效成分和离子交换剂结合不牢。 洗脱液的选择主要是使和离子交换结合的成分解离下来。离子强度比起始缓冲液高。 缓冲液的选择关键在于有效成分的等电点。对于一种提取分离的未知有效成分而言，其等电点须通过试验才能确定。 3、加样量的确定 层析时加样量的多少除与离子交换剂的总交换容量大小关系密切外，还与样品中有效成分的吸附性能以及有效成分与杂质之间的比例等因子有关。 四 　操作 　1、交换剂的预处理、再生和转型 干树脂加过量的水除细颗粒 用水浸泡2小时减压抽去气泡 去离子水洗至澄清 4倍量的2mol/L HCl溶液，搅拌4小时 4倍量的2mol/L NaOH溶液，搅拌4小时 酸或碱处理 去水 水洗至中性 水洗至中性 离子交换剂的再生是指对使用过的离子交换剂进行处理，使其恢复原来性状的过程。酸碱交替浸泡的处理方法就可以使离子交换剂再生。 离子交换剂的转型是指离子交换剂由一种平衡离子转为另一种平衡离子的过程。如对阴离子交换剂用HCl处理可将其转为Cl型，用NaOH处理可转为OH型，用甲酸钠处理可转为甲酸型等等。对离子交换剂的处理、再生和转型的目的是一致的，都是为了使离子交换剂带上所需的平衡离子。 长期使用后的树脂含杂质很多，欲将其除掉，应先用沸水处理，然后用酸、碱处理之。长期使用的树脂，需先用沸水处理，然后用酸处理，若含有脂溶性杂质，可用乙醇或丙酮处理。长期使用过的亲水型离子交换剂的处理，一般只用酸、碱浸泡即可。对琼脂糖离子交换剂的处理，在使用前用蒸馏水漂洗，缓冲溶液平衡后即可。 离子交换剂去除杂质的原则：不破坏离子交换剂的结构和稳定性，不影响其原有的交换容量。 　(1)离子交换层析柱选择 　 简单的层析柱可用碱式滴定管代替，底部熔接有滤板。柱的高度依分离物质的不同而定，柱的直径与高度的比以1：20左右为宜。 如采用离子强度较大的梯度洗脱时，以选用粗而短的柱子为宜柱高与直径的比例要降低，甚至为2：1。 用交联葡聚糖离子交换剂和纤维素离子交换剂时，常用的柱高为15～20cm。 3、样品上柱、洗脱和收集 (2)装柱 　转型再生好的交换剂先放入烧杯，加少量水，边搅拌边倒人垂直固定的层析柱中，使交换剂缓慢沉降。交换剂在柱内必须分布均匀，不应有明显的分界线，严防气泡产生，否则将严重影响交换性能。 　　离子交换剂的装柱量要依据其全部交换量和待吸附物质的总量来计算。当溶液含有各种杂质时，必须考虑使交换量留有充分余地，实际交换量只能按理论交换量的25％～50％计算。 　　　装柱完毕，通过恒流泵加入起始缓冲溶液，流洗交换剂，直至流出液的pH与起始缓冲溶液相同。关闭层析柱出液口，准备加样。 　　　打开柱出液口，待缓冲溶液下移至柱床表面时，关闭出液口。用滴管加入已用起始缓冲溶液平衡后的样品。沿柱内壁滴加样品，待样品液加到一定高度后，再移向中央滴加，务必使样品液均匀分布于柱床全表面。然后打开出液口，待样品液全部流人柱床时，先用少量起始缓冲溶液冲洗柱内壁，再接上洗脱装置，按一定速率加入洗脱液，开始层析分离。　　 　　由于被吸附的物质不一定是所要求的单一物质，因此除了正确选择洗脱液外，还采用控制流速和分部收集的方法来获得所需的单一物质。因不同物质的极性不同，容易交换的先流出来，根据先后顺序就能得到较纯的物质。 部分收集器 梯度混合器 层析柱 柱层析设备 可见光分光光度计 蠕动泵 　企业利用的层析柱 * Ⅱ　离子交换层析 离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种