aβl40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和jnk信号转导通路的变化word格式论文.docxVIP

aβl40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和jnk信号转导通路的变化word格式论文.docx

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aβl40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和jnk信号转导通路的变化word格式论文

学术诚信承诺本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作 及取得研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论 文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,也不包含为获得佳木斯大 学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对 本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。签名: 日期: 关于论文使用授权的说明本人完全了解佳木斯大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文 的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)签名: 导师签名: 日期: 目录一、中文摘要1二、英文摘要4三、前言7四、文献综述9五、材料与方法15六、结果24七、讨论30八、结论33九、参考文献34十、致谢38十一39、英文缩写十二、攻读学位期间发表的论文40十三、附图41摘要目的:探讨钾通道在 Aβl-40 诱导的神经干细胞凋亡过程中发挥的作用;探讨 JNK 信 号转导通路在 Aβl-40 诱导的神经干细胞凋亡中的作用;以及钾通道与 JNK 的关系。进一 步了解阿尔茨海默病( Alzheimer’s disease, AD)的发病机制,从而为开发治疗 AD 药物提 供新的思路和方法。方法:1.分离提取新生的 Wistar 大鼠海马区的神经干细胞并传代培养,应用 Nestin 细胞免疫化学法鉴定。2.应用 MTT 法检测 TEA 干预 Aβ1-40 诱导后的神经干细胞存活率 的变化。3.应用 Hoechst33342 染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形 态学变化。4.应用比色法检测 TEA 对 Aβ1-40 诱导的神经干细胞 Caspase-3 活性的变化。5. 应用 Western blot 法检测 Aβ1-40 诱导神经干细胞不同时间点 JNK 磷酸化的表达。6.应用 MTT 法 检 测 SP600125 干预 Aβl-40 诱导 的 神 经 干 细 胞 存 活 率 的 变 化 。 7. 应用 Hoechst33342 染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形态学变化。8.应 用比色法检测 SP600125 干预后 Aβ1-40 诱导的神经干细胞 Caspase-3 活性的变化。9.由于 Aβl-40 诱导的神经干细胞 JNK 磷酸化激活在 24h 达到高峰,故在这个时间点,孵育前 30min 加入 TEA 5mM,应用 Western blot 方法检测 TEA 对 Aβl-40 诱导的神经干细胞 JNK 磷酸化的影响。结果:1. 12h 内新生大鼠海马区分离的单个神经干细胞相互聚集成团状,3d 后呈透 亮的圆形,传代培养至第三代可见培养液中形成较大的神经球,神经干细胞标记性蛋白 Nestin 的表达阳性。2.1 TEA 对 Aβ1-40 诱导的神经干细胞存活率的影响,结果显示:与 空白对照组相比 Aβ1-40 组神经干细胞存活数明显减少(p<0.05),且随时间延长神经干细 胞存活率下降。与 Aβ1-40 组相比 Aβ1-40+TEA 组神经干细胞存活率明显升高 (p<0.05)。 2.2 TEA 对 Aβ1-40 诱导的神经干细胞凋亡的影响。结果显示:荧光显微镜下 Aβl-40 组神 经干细胞 48h 后出现部分细胞核呈浓染的碎块状,为典型的凋亡形态学改变。与 Aβl-40 组相比 Aβ1-40+TEA 组神经干细胞凋亡形态学变化少,凋亡率 11.6%±0.4%,差异具有 显著性 (p<0.01)。2.3 TEA 对 Aβ1-40 诱导的神经干细胞 Caspase-3 活性的影响。结果显 示:与 Aβl-40 组相比 Aβ1-40+TEA 组在各时间点均可降低 Caspase-3 的表达 (p<0.05),特别在 24h 这个时间点更为明显 (p<0.01),TEA 可明显阻止 Aβl-40 诱导凋亡蛋白Caspase-3 的发生。3.1 Aβ1-40 诱导神经干细胞 JNK 磷酸化的表达。结果显示:在不同时 间点,神经干细胞经 Aβ1-40 5μM 孵育后,JNK 的磷酸化均有表达。与空白对照组相比 Aβl-40 组 JNK 磷酸化水平随着时间的延长表达逐渐增加,在 24h 达到高峰,(p<0.01)。 3.2 SP600125 对 Aβl-40 诱导的神经干细胞存活率的影响。结果显示:与 Aβl-40 组相比 Aβl-40+SP600125 组可明显减轻神经干细胞凋亡,且随时间的延长神经干细胞存活率逐渐升 高。3.3 SP600125 对 Aβl-40 诱导的神经干细胞凋亡的影响。结果显示:与 Aβl-40 组相比 Aβl-40+SP600125

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