cx43 rna干扰防治迟发性缺血性神经功能障碍dind的体内实验研究word格式论文.docxVIP

摘要目的：自发性蛛网膜下腔出血（SAH）占脑血管意外的5%左右，在脑血管意外中仅低于脑内出血和脑梗死的发病率，但SAH的病死率明显高于后两者[1]，并且目前缺乏特效治疗措施。SAH后出现的迟发性缺血性神经功能障碍（DIND）是导致高致死高致残率的主要原因。DIND一直是神经外科学者研究的重点和热点。DIND 的致病因素，公认的主要的两个理论：即大血管的延迟性痉挛，及微血管的功能紊乱。我们实验室前期研究表明：缝隙连接（GJ）可能在自发性蛛网膜下腔出血后的DIND病理过程中起到十分重要的作用。应用特异性的Cx43 siRNA可有效地沉默缝隙连接蛋白43（Cx43）的表达水平，同时能减轻脑血管痉挛的程度[40]。在前期研究的基础上，本实验拟验证：有效下调缝隙连接Cx43 后对SAH后发生的DIND的影响。方法：1、二次注血模型的建立：采用普通级SD大鼠，腹腔麻醉后抽取尾静脉血约0.3ml备用，体式显微镜下枕大池穿刺，见清亮脑脊液流出约0.1ml，将尾静脉血注入，次日进行同前步骤，完成整个造模过程。2、SAH模型的鉴定：分为单纯SAH造模组和正常组（假手术组），第七天应用墨汁染色法测量基底动脉直径及神经功能评分评价神经功能缺损，鉴定SAH模型。3、病毒的沉默效率检测：采用腺病毒枕大池注射设立病毒处理组，单纯SAH 组和正常组对照。分1d，3d，7d，14d 四个时间点处死SD大鼠，取基底动脉，Westernbloting检测病毒沉默Cx43 的效率。4、神经功能评分：单纯SAH造模组和正常组，预处理组，处理组等分7d，14d两个时间行神经功能评分（改良的garciaJH 和beam balance评分法）。5、MRI检测：正常组和单纯SAH造模组，预处理组，处理组分7d，14d两个时间点行MRI（DWI，PWI）检测，包括脑血流量（CBF），表观弥散系数（ADC）值的检测。结果：1、印度墨汁染色法检测基底动脉直径，造模后7天，单纯SAH造模组的II基底动脉直径明显小于假手术对照组。2、腺病毒沉默效率检测：腺病毒脑池注射可以有效的沉默脑血管的Cx43表达。3、神经功能评分：改良的garcia评分法：SAH组与正常组比，7d，出现神经功能缺损症状，14天神经功能缺损症状与正常组比无明显差异；所有的实验处理组与单纯SAH组比较，均不存在明显的神经功能缺损；Beam balance评分法，7d，14d 所有组别之间不存在明显差异。4、MRI结果：SAH组与正常组比较，7d出现CBF及ADC值的下降；病毒预处理组和病毒处理组与单纯的SAH造模组比，7d可以改善CBF，14天未能改善CBF，7d，14d均未能改善ADC值；甘珀酸预处理、甘珀酸处理组、病毒溶媒预处理组、病毒溶媒处理组、甘珀酸溶媒预处理组及甘珀酸溶媒处理组与单纯SAH组比较，在7d 和14d 两个时间点未能改善CBF，ADC值。结论：1、自体尾静脉血二次枕大池注血模型能够再现SAH的病程。2、枕大池注射腺病毒，特异性下调Cx43 后可以改善SAH后的CBF，提示能够改善SAH的预后。关键词：SAH；缝隙连接；Cx43；DIND；siRNA；CBF；ADCIIIABSTRACTObjective：Spontaneoussubarachnoidhemorrhage(SAH)accountedforabout 5%ofthestroke,lowerthantheincidenceofintracranialhemorrhageandcerebral infarction, but thecasefatalityrate is higher than thelattertwo[1].And lack of specific treatment atpresentin Global. SAHhasalways been aneurosurgeryscholars research hotspotandfocus.LeadtoDINDofpathologicalchanges:delayedcerebralvaspasm (DIC),ThemaincauseofDCIisdelayedcerebralvasospasmandmicrocirculation dysfunction.Earlyresearchatourlaboratoryshowsthatgapjunctionmaybeplaya veryimportantroleindelayedischemicneurologicaldeficitaftersubarachnoid hemorrhage(DIND).ApplicationspecificsiRNAinterferencecaneffectivelysilent gapjun