cxcl12cxcr4生物轴在乳腺癌三苯氧胺耐药机制中的作用研究word格式论文.docxVIP

目录引言1第一部分MCF-7三苯氧胺耐药细胞的诱导培养与鉴定3材料与方法3结果9第二部分CXCL12/CXCR4生物轴在乳腺癌三苯氧胺耐药细胞中的作用12材料与方法12结果18讨论25结论28参考文献29综述33主要中英文对照缩略词表44攻读学位期间公开发表的论文46致谢47引言近二十年来，乳腺癌的发病率和死亡率在我国逐年上升且呈现年轻化趋势，已跃居为女性恶性肿瘤的首位，危害日益严重。随着科学技术的进步和对肿瘤生物学特性认识的提高，目前提出手术为主，化疗、放疗、内分泌治疗、生物治疗等多种治疗结合，多学科合作的理念，使乳腺癌患者的总体生存率得以大幅提高。内分泌治疗是乳腺癌治疗的重要手段之一，从70年代起已做为乳腺癌的辅助治疗广泛应用于临床。三苯氧胺（他莫昔芬，Tamoxifen，TAM）能够显著抑制乳腺癌细胞分裂增殖，通过与雌激素(Estrogenreceptor，ER)竞争结合雌激素受体（Estrogen receptor,ER），抑制雌激素促增殖的活性，使细胞阻滞于G0/G1期，肿瘤细胞生长受到抑制，实现其抗肿瘤的作用[1]。根据乳腺癌临床实践指南（2011 年中国版），凡是雌激素受体（EstrogenReceptor，ER）和/或孕激素受体 (Progesteronereceptor,PR)阳性的浸润性乳腺癌患者，不论年龄、淋巴结状态、是否应用化疗，均需辅助内分泌治疗。TAM已广泛用于绝经前和绝经后乳腺癌的治疗，然而TAM治疗过程中，肿瘤细胞产生TAM耐药，导致治疗失败。有文献报道， TAM耐药的发生率约30%左右[2]。迄今为止其耐药形成机制尚未完全阐明。CXCR4主要分布在淋巴组织、脑、脾脏、胃、小肠、胸腺和正常干细胞等多种组织中[3]。CXCL12是目前已知唯一能与CXCR4 结合并能激活它的天然趋化因子。 CXCL12在肺、肝、骨骼肌、脑、肾、心、骨髓等多种组织器官中表达[4]。CXCL12/CXCR4 生物轴不仅在免疫系统、胚胎发育过程中作用突出[5]，而且在炎症反应、变态反应、组织修复、心血管疾病、肿瘤发生发展等方面起重要作用[6]。在肿瘤方面，趋化因子与其受体结合激活ERK/MAPK，PI-3K/Akt/mTOR，Jak/STAT等多种细胞通路，介导肿瘤细胞粘附内皮组织、从血管外渗、迁移定植、血管形成、免疫逃避等，参与肿瘤细胞侵袭迁移[7, 8]。CXCR4与Her2/EGFR受体一样也是G蛋白偶联受体家族成员，在乳腺癌细胞中两者通过泛素化作用相互调节表达，增强其促肿瘤转移作用[9]。在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，CXCL12单独不能介导细胞迁移，而同时加入表皮生长因子（Epidermal引言CXCL12/CXCR4生物轴在乳腺癌三苯氧胺耐药机制中的作用研究growth factor，EGF）后，细胞迁移明显增加[10]。在人滋养层细胞中，环孢霉素A 可以通过CXCL12/CXCR4生物轴激活EGFR及下游ERK通路[11]。在表达EGFRⅧ变体的乳腺癌细胞中，不管ER水平如何，CXCR4均表达升高，下游P38 MAPK通路同步增强。用 RNA干扰CXCR4表达后，EGFRⅧ表达减少，同时细胞侵袭能力降低[12,13]。使用EGFR抑制剂Iressa可以有效阻断雌激素介导的CXCR4表达上调[14]。有研究显示，乳腺癌细胞可以通过ER转录途径，诱导癌细胞自身产生CXCL12 及CXCR4表达[15]。Rhodes[16]等为了观察人间质干细胞对肿瘤细胞的影响，将间质干细胞与MCF-7乳腺癌细胞共培养后，培养液中CXCL12表达水平升高，MCF-7细胞增殖和迁移侵袭能力增强；该效应有CXCL12/ CXCR4和ER信号通路共同参与，用抗雌激素和CXCR4拮抗剂分别阻断这两条通路时，并不能降低间质干细胞的诱导效应，两者联合应用时才能抑制细胞增殖迁移。在T47D细胞中，加入雌激素（17β-estradiol，E2）可以刺激细胞分泌CXCL12，细胞增殖加速[17]。而外源性CXCL12 处理细胞MDA-MB-361及过表达CXCR4的MCF-7可出现ER-α磷酸化，说明通过CXCR4 通路激活ERα[18]。因此，CXCL12/ CXCR4与EGFR、ER通路之间有交联作用，相互影响。本研究拟通过人工诱导乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺细胞株，观察CXCR4、 EGFR/HER2、Src关系，检测细胞活性改变及蛋白表达差异，探讨乳腺癌内分泌治疗耐药的机制，为内分泌耐药的预防及治疗提供新的思路。第一部分MCF-7三苯氧胺耐药细胞的诱导培养鉴定一、材料与试剂材料与方法1.主要仪器设备生物安全柜新加坡ESCOAC2-4S1倒置显微镜日本OlympusIMT-2CO2细胞培养箱液氮罐美国THERMOELECTRON3111