cxcl12审审cxcr4轴在缺氧诱导胰腺癌细胞体外侵袭迁移中的机制研究word格式论文.docxVIP

成熟、血管生成、造血干细胞的归巢等。同时在HIV感染、炎性反应、血管生成、多种肿瘤的播散和器官特异度转移中发挥着重要的作用。最近Hermann等[9]通过免疫磁珠分选法从人胰腺癌组织及胰腺癌细胞株L3.6p中分选出CD133+的细胞，并在无胸腺小鼠的体内致瘤实验中证实该细胞株亚型具有高致瘤能力。在CD133+细胞中可分为CXCR4+和CXCR4-两种细胞亚群，并在胰腺癌标本的侵袭前沿存在CXCR4+的癌细胞。进一步应用L3.6p CD133+CXCR4+和CD133+CXCR4-细胞，分别接种于小鼠皮下，发现两组成瘤率相似，而CXCR4+细胞组可在静脉血中检测到CD133+CXCR4+细胞,而CXCR4-组未能检测到CD133+细胞。尸检发现CXCR4+组有肝转移。使用CXCR4的特异性阻滞剂能抑制转移。提示CXCR4在胰腺癌转移过程中起重要作用。Müller等[10]发现在乳腺癌组织中存在CXCR4和CCR7，而CXCR4的配体CXCL12在乳腺癌转移最常见的器官(如肺、肝、骨髓、淋巴结)高表达，而在很少转移的肾脏不表达。Marchesi等[5]研究发现，转移灶或癌性腹水来源的胰腺癌细胞株CXCR4mRNA 表达明显高于原发灶来源的胰腺癌细胞株。Wang等[11]利用短发夹RNA干扰技术抑制胰腺癌细胞株Miapaca-2中CXCR4的表达后，细胞的体外侵袭能力明显下降。Saur 等[12]使小鼠胰腺癌细胞株TD-2过表达CXCR4 后，建立鼠尾静脉注射转移模型，结果发现血道和淋巴道转移发生率都显著提高，而且在CXCL12 高表达的肺、肝、淋巴结等器官的转移率明显高于CXCL12低表达的器官，并且CXCR4 拮抗剂AMD3100 可以明显抑制肺、肝、淋巴结转移的发生，提示CXCL12-CXCR4轴的激活尤其是CXCL12的特征性分布，在肿瘤转移的器官选择性上起重要作用。CXCL12-CXCR4轴可调控多个基因的表达。Nagakawa等[13]研究发现，用浓度300ng/ml的CXCL12培养24小时，发现MMP2和MMP9的活性明显增强。尿激酶型纤溶酶原激活物受体uPAR，在细胞外基质降解这一过程中也起重要作用。Wang等[11]发现Miapaca-2细胞敲除CXCR4的表达可使MMP9、uPAR的mRNA和蛋白表达下调。Serratì等[14]在乳腺癌中发现CXCL12和CXCR4结合可激活JNK 激酶的磷酸化，促进上皮细胞内uPA和癌细胞膜表面uPAR的表达，增强了乳腺癌的侵袭能力。提示CXCL12-CXCR4 的信号激活可上调MMP2、MMP9、uPAR的表达和/或活性增强，促进基底膜降解，在肿瘤侵袭转移中起重要作用。已有研究表明：缺氧可通过HIF-1α调控肿瘤侵袭迁移相关靶基因，如VEGF、CXCR4、MMP、uPAR 等；而CXCL12-CXCR4也可以通过各种信号通路调控MMP、uPAR等表达。Sun等[15]采用qRT-PCR和Westernblot的方法，证实CXCL12-CXCR4轴通过增加MMP1的表达介导缺氧诱导的软骨肉瘤细胞的侵袭迁移。因此，本课题提出假设：缺氧条件下，HIF-1α可能通过调控CXCL12-CXCR4轴调节MMP2、MMP9、uPAR的表达，参与胰腺癌的侵袭迁移。本研究拟从Westernblot和实时荧光定量PCR检测Panc-1细胞HIF-1α、CXCR4、MMP2、MMP9、uPARmRNA和蛋白的表达，探索CXCL12-CXCR4轴缺氧诱导胰腺癌细胞侵袭转移的分子机制。CXCL12-CXCR4轴在缺氧诱导胰腺癌侵袭转移中的机制研究前言缺氧微环境下，细胞内HIF-1α稳定表达，转位到核内，与HIF-1β亚基结合，形成缺氧诱导因子-1。HIF-1与核内其下游靶基因上的缺氧反应元件HRE结合，参与启动靶基因的转录，如VEGF[16]、AMF[17]等。Marchesi等[5]体外研究证实缺氧培养胰腺癌细胞株可上调CXCR4mRNA的表达，最近Maréchal等[6]在胰腺癌组织的研究中发现，HIF-1α的表达与CXCR4的表达呈正相关，说明缺氧诱导CXCR4的表达可能是通过HIF-1α途径实现的。Staller等[7]应用凝胶迁移阻滞法证实了CXCR4 的启动子上存在HIF-1α 结合位点，提示缺氧上调CXCR4可通过HIF-1α直接与CXCR4启动子结合并促进CXCR4转录活性。本课题前期研究已证实胰腺癌组织内HIF-1α 与CXCR4 呈正相关、CXCR4 与MMP2、MMP9、uPAR 的表达呈正相关，并且四者的表达与淋巴结转移、PTNM 分期相关。本课题组前期通过免疫组化和Traswell小室侵袭迁移实验发现CXCL12-CXCR4轴在缺氧诱导胰腺癌细胞侵袭转移中发挥重要作用