cxcr4cxcr7在sdf1诱导间充质干细胞增殖 迁移中的作用及信号转导机制分析word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 2 结果 ………………………………………………………………………29 2.1 MSCs 分离培养、鉴定…………………………………………………29 2.2 RT-PCR 检测 MSCs 的 CXCR4 和 CXCR7 表达………………………… 29 2.3 MTT 法检测 SDF-1 诱导的 MSCs 增殖……………………………………29 2.4 SDF-1 诱导的 MSCs 体外迁移……………………………………………30 3 讨论 ………………………………………………………………………32 4 结论 ………………………………………………………………………34 参考文献………………………………………………………………………35 综述……………………………………………………………………………41 致谢……………………………………………………………………………54 研究生在读期间发表的论文…………………………………………………56  PAGE 56 CXCR4/CXCR7 在 SDF-1 诱导间充质干细胞增殖、 迁移中的作用及信号转导机制研究 中 文 摘 要 目的：（1）建立一种骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs）的体外分离纯化、扩增的方法，探讨 MSCs 向平滑肌细胞诱导 分化的可行性。（2）体外探讨 CXCR4/CXCR7 在 SDF-1 诱导 MSCs 增殖和迁 移中的作用及与磷脂酰肌醇 3 激酶(Phosphoinositide 3-kinase, PI3K)/核因子 -κB（Nuclear factor kappa B，NF-κB）信号通路的关系，为后期整体动物实验 提供实验依据。 方法：（1）全骨髓培养法分离培养、鉴定 MSCs，利用血小板源性生长 因子-BB（Platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB）和转化生长因子 β1 （Transforming growth factor-β1,TGF-β1）进行联合诱导，诱导期间观察细胞形 态变化，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测平滑肌细胞特异性标记 α-平 滑肌肌动蛋白 (α-smooth muscle actin, α-SMA )、钙调蛋白（calponin）、平滑 肌钙结合相关蛋白（smooth muscle 22α, SM22α）和平滑肌肌球蛋白重链 （Smooth muscle-myosin heavy chain,SM-MHC）的表达；免疫细胞化学检测 前三种标记物蛋白表达。（2）RT-PCR 检测不同浓度 SDF-1 诱导前后 MSCs 的 CXCR4 和 CXCR7 的表达。以 PI3K 抑制剂渥曼青霉素（Wortmanin）、NF-κB 抑制剂二硫代氨基吡咯烷（PDTC）、CXCR4 抗体(anti-CXCR4)和 CXCR7 抗 体(anti-CXCR7)作为工具药，四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法和 Transwell 迁移实验分别检测 MSCs 的增殖和跨膜迁移。 结果：（1）①MSCs 接种 24~48 h 后，贴壁细胞多为圆形、多角形、梭形， 传至第 3 代呈现形态均一的长梭形细胞；P3 代 MSCs 强表达 CD44, 低表达 CD106，不表达 CD11b、CD45，具有成脂、成骨等多向分化能力。②MSCs 经 50ng/ml PDGF-BB 和 5ng/ml TGF-β1 联合诱导后细胞形态明显改变，呈细 长梭形，可重叠生长，局部融合后可呈平滑肌细胞典型的“峰-谷”状；RT-PCR 检测结果显示 MSCs 诱导前后均表达 a-SMA、SM22a、Calponin 和 SM-MHC， 但诱导后表达明显增强(P0.01）；免疫细胞化学检测结果同 RT-PCR 基本一 致。（2）①MSCs 同时表达 CXCR4 和 CXCR7，SDF-1 诱导后 CXCR4 表达增 高（P0.01），而 CXCR7 表达无明显变化(P0.05)。②SDF-1 组 MSCs 的增殖 和跨膜迁移较正常对照组显著提高（P0.01），且具有一定浓度依赖性。 ③SDF-1 + Wortmanin 组(E)、SDF-1 + Wortmanin + PDTC 组(F)、SDF-1 + anti-CXCR4 组(G)和 SDF-1 + anti-CXCR7 组(H)细胞的增殖较同等剂量 SDF-1 组显著降低（P0.01），而同型抗体 IgG 组（I）与同等剂量 SDF-1 组相比无 统计学意义（P0.05），另外，SDF-1 + Wortmanin + PDTC 组细胞的增殖亦低 于 SDF-1 +Wortm