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优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录 第一章 文献综述 1 1.1 原核生物染色体 DNA 复制 1 1.1.1 原核生物基因组的结构特点 1 1.1.2 原核生物染色体 DNA 的复制机制 2 1.2 原核生物染色体 DNA 复制起始区及复制起始蛋白 5 DNA 的复制起始区 5 DNA 复制起始蛋白 6 1.3 原核生物染色体复制起始区预测及验证 8 1.3.1 复制起始区的预测 8 1.3.2 复制起始区的验证方法 10 1.4 本研究的具体内容及研究路线 13 1.4.1 研究内容 14 1.4.2 技术路线 15 第二章 克隆及表达载体的构建 16 2.1 实验材料 16 2.1.1 载体及菌株 16 2.1.2 实验主要试剂 17 2.1.3 实验器材 18 2.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 18 2.2 载体构建方法 19 2.2.1 引物的设计与合成 19 2.2.2 目的基因的获取 20 2.2.3 提取质粒 pGEX-4T-1 与 pET28a 并电泳鉴定 22 2.2.4 目的基因及质粒的双酶切 23 2.2.5 目的基因与载体的连接、转化及培养 25 2.2.6 阳性重组子的鉴定 26 2.3 实验结果 27 2.3.1 PCR 扩增目的基因及质粒载体的提取 27 2.3.2 目的片段及质粒载体的双酶切 29  PAGE 3 2.3.3 阳性重组子的鉴定 30 2.4 本章小结 33 第三章 复制起始蛋白 GST-DnaA 与 DnaA(IV)的表达与纯化 34 3.1 实验材料 34 3.1.1 菌株 34 3.1.2 实验主要试剂 34 3.1.3 实验器材 34 3.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 34 3.2 实验方法 36  HYPERLINK \l _TOC_250005 3.2.1 基因工程菌的生长曲线及 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的性质 36  HYPERLINK \l _TOC_250004 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白诱导条件的确定 37  HYPERLINK \l _TOC_250003 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的表达纯化 38 3.3 实验结果 41  HYPERLINK \l _TOC_250002 3.3.1 基因工程菌的生长曲线及 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的性质 41  HYPERLINK \l _TOC_250001 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白诱导条件的确定 43  HYPERLINK \l _TOC_250000 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的纯化 44 3.4 本章小结 47 第四章 复制起始蛋白与复制起始区结合性实验 48 4.1 实验材料 48 4.1.1 DnaA(IV)蛋白 48 4.1.2 实验主要试剂 48 4.1.3 实验器材 48 4.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 48 4.2 实验方法 49 4.2.1 ori C 区的扩增 49 4.2.2 引物设计及退火 50 4.2.3 EMSA 验证 ori C 与 DnaA(IV)的结合 51 4.3 实验结果 52 4.3.1 线状及环状染色体 ori C 的扩增 52 4.3.2 EMSA 验证 ori C 与 DnaA(IV)蛋白的结合 53 4.4 本章小结 57 第五章 结论与展望 58 5.1 结论 58 5.2 展望 59 参考文献 60 发表论文和参加科研情况 64 致 谢 65 第一章 文献综述  PAGE 7 第一章 文献综述 1.1 原核生物染色体 DNA 复制 现代生物学的发展已经充分证明，DNA 是生物间保持遗传特性的物质基础， 是生物性状从亲本向子代传递的载体。所谓 DNA 复制，就是以亲本 DNA 分子 为模板，在碱基互补配对原则指导下，进行子代 DNA 分子的合成。生物体的遗 传特性在 DNA 分子上以一定脱氧核苷酸序列顺序保存，通过 DNA 复制，亲本 可以将遗传信息传给子代，通过转录和翻译来完成执行各种生命功能的特定蛋白 质的合成[1, 2]。 1.1.1 原核生物基因组的结构特点 原核细胞构成原核生物，原核生物又可以分为古菌和细菌，两者的差别集中 在核区和其他细胞器结构和功能上。原核生物染色体 DNA 主要分布在细胞质中， 有没有全功能的细胞器，与古生物，真核生物一起成为生物进化三个谱系。 原核生物基因存在诸多独特的功能特性：