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基因组学研究技术 20世纪科学史上三个里程碑: 编 码 链：基因5′—3′的单链。 非编码链：基因3′—5′的单链。 外显子（exon）：编码链上的编码序列。 内含子（intron）：编码链上的非编码序列。 GT—AG法则：在内含子的5′和3′端分别存在一个 保守序列GT和AG。 在Tom第三次生病的时候，父母开始担心了，父亲问母亲：“为什么这个孩子总是得病？他总是认为母亲有义务说明孩子们的状况。当母亲不能解释发生了什么的时候，父亲决定带Tom去看医生。医生问了Tom的作息，得知其疼痛多发生在游泳以后，并发现Tom的手有点肿涨。因此，建议做血液和X光片检查。血液检查结果显示红细胞部分呈镰刀状，X光片显示手掌由于指炎而肿涨。因此，初诊为镰状细胞贫血。 基因诊断——连锁分析法原理 基因诊断——斑点杂交法 鉴定新的蛋白与蛋白相互作用 鉴定蛋白级联底物 鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响 在已知的相互作用中鉴定干扰蛋白质 (反向双杂交系统) 鉴定新的蛋白与蛋白相互作用 鉴定蛋白级联底物 鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响 在已知的相互作用中鉴定干扰蛋白质 (反向双杂交系统) 假阳性是酵母双杂交系统的最大问题 1. prey蛋白的非特异性结合 2. 无需与诱饵蛋白结合就能诱导报告基因的转录 miRNA作用机制 miRNA作用机制 miRNA作用机制 miRNA作用机制 miRNA与siRNA的区别 miRNA检测方法 miRNA检测方法 miRNA检测方法 miRNA靶基因预测 / miRNA靶基因报告基因验证 miRNA相关多态性的研究进展 miRNA相关多态性的研究进展 siRNA的合成方法 U6 Sense sequence Anti-sense sequence Hair-pin loop Sense sequence Anti-sense sequence 各种载体的比较 载 体 费用 长 处 短 处 质 粒 低 可以比较简单 地大量制备 RNAi效果持续时间 短，导入效率低 腺 病 毒 高 导入效率高， 可感染静止期 的细胞 RNAi效果持续时间 短，制备病毒较费 时间 逆 转 录 病 毒 中 RNAi效果持续 时间长 不能感染静止期的 细胞 基因治疗策略 1、直接基因治疗：纠正突变基因 在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） 2、间接疗法： 以正常的基因替代致病基因。导入外源正常基因，没有去除或修复有缺陷的基因。用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 基因治疗的途径： 1、生殖细胞基因治疗：将正常基因转移到患者生殖细胞（精细胞，卵细胞，早期胚胎）使其发育成正常个体。为理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中散播。 2、体细胞基因治疗：将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。 基因治疗的方法： 目的基因的获得---人工合成、逆转录、基因组DNA 外源基因的转移--- 物理方法：电穿孔法、显微注射法、微粒子轰击法 化学法：磷酸钙沉淀法、脂质体(Liposome) 融合法 病毒介导基因内转移（Viral mediated transfer） 逆转录病毒(RNA) 常用的病毒载体 DNA病毒 病毒载体构建 靶细胞的选择 靶细胞是指接受外源Gene的体细胞 选择靶细胞的原则是： 1）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术操作； 2）易于由人体分离又便于输回体内 3）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至几年，或整个生命周期） 4）易于受外源遗传物质转化。 基因治疗的应用 复合免疫缺陷综合征的基因治疗（人类Gene治疗成功例子） ADA缺乏症——致死性疾病，患者由于腺苷酸脱氨酶（ADA）缺乏。 黑色素瘤的基因治疗 肿瘤浸润淋巴细胞——TIL，它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。 反义核酸基因治疗 小非编码RNA的研究进展 Non-coding RNA 的类型 siRNAs ：small interfering RNAs miRNAs：mic