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第7章体细胞杂交和胞质杂交 §7.1 体细胞杂交 §7.1.1 体细胞杂交的概念与步骤 一、体细胞杂交的概念 体细胞杂交（somatic hybridization ）是在离 体条件下通过两个亲本体细胞原生质体的融合以 及随后将相融合产物（异核体）培养成杂种植株 的过程。 Carlson （1972）在粉蓝烟草和郞氏烟草之间 通过原生质体融合获得首例体细胞杂种。 二、体细胞杂交的步骤 1 原生质体制备 2 原生质体融合 3 杂种细胞选择 4 杂种细胞培养 5 杂种愈伤组织再生植株 6 杂种植株的鉴定 图7-1 （11-1） 三、体细胞杂交的意义 1 把亲缘关系较远，甚至毫无亲缘关系的生物体 细胞融合在一起，为远缘杂交架起了桥梁，是 改造细胞遗传物质的有力手段。 2 为携带外源遗传物质（信息）的大分子渗入细 胞创造条件：如为携带抗病基因的载体（Ti、 Ri ）渗入细胞，或细胞器（线粒体、叶绿体） 渗入细胞创造了条件。 抗盐碱耐干旱小麦新品种 /pinzhong/nong2.htm 抗盐碱耐干旱水稻新品种 /pinzhong/nong1.htm 抗盐碱耐干旱葡萄新品种 /pinzhong/jing1.htm §7.1.2 原生质体融合的方法 一、自发融合 在酶解细胞壁过程中，有些相邻的原生质体能彼此 融合形成同核体（homokaryon ），每个同核体包含2～ 40个核。这种类型的原生质体融合称做“ 自发融合”，它 是由不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连造成的。 例如，在玉米胚乳愈伤组织细胞和玉米胚悬浮细胞 原生质体中，大约有50 ％是多核融合体。 采用两步法制备原生质体，或在用酶混合液处理之 前先使细胞受到强烈的质壁分离药物的作用，则可切断 胞间连丝，减少自发融合的频率。 二、诱发融合 在体细胞杂交中，不同来源的原生质体诱 导融合一般需要使用一种适当的融合剂。 诱导原生质体融合的方法有NaNO3 、人工 海水、溶菌酶、用机械方法诱导粘连、病毒、 明胶、高pH-高浓度钙离子、聚乙二醇、抗 体、植物凝血素伴刀豆球蛋白A 、聚乙烯醇、 电刺激等。 （一）化学诱导融合 1 NaNO 处理 3 Kuster （1909）在一个发生了质壁分离的 表皮细胞中，低渗NaNO3溶液可以引起2个亚原 生质体的融合。 Power等（1970）由NaNO3诱导可重复可 控制的离体原生质体融合。 Carlson等（1972）在植物中获得了第一个 体细胞杂种。 2 高pH-高浓度钙离子 1973年Keller和Melchers报道，当用强碱性 （pH10.5 ）高浓度钙离子（50mmol/L CaCl ·2H O ） 2 2 溶液在37 ℃下处理约30min 以后，两个品系的烟草叶 肉原生质体很容易彼此融合。 Melchers和Labib （1974）及Melchers （1977） 在烟草属中分别获得了种内和种间的体细胞杂种。 对于有些原生质体系统来说，这样的高pH可能是 有毒的。 3 聚乙二醇（PEG ） 聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG ）分子 式HOCH （CH -O-CH ）nCH OH，水溶性，pH 2 2 2 2 从4.6到6.8，因聚合程度不同而异，是一种多聚化 合物，商品名卡波蜡（Carbowax ）。实验室用的 平均相对分子质量在200～20000之间，一般1000以 下为液体，1000以上为固体。 1974年加籍华人高国楠利用PE