PCR的经验及教训.pptVIP

设置程序： PCR 反应条件如下： 步骤 循环数 步骤 温度 时间 逆转录 1 1 42℃ 30 min 失活 MLV， 激活 Taq 实时荧光 定量 PCR 2 X℃ 30 sec 40 3 72℃ 30 sec 1 1 95℃ 10 min 1 95℃ 15 sec TaqMan法与SYBR Green 1法的比较 定量与普通PCR的差别 PCR的小技巧 模板：纯度要高，完整性要好，浓度要适当 引物：一次多设计几组，同时PCR；拿到的引物一般是干粉，尽量用其中一管，避免反复冻融；前期引物设计多花心思，提高引物质量 聚合酶：有条件者全程用Pfu高保真酶，防止突变；严格放置冰盒，防止失活 操作细节：全程严格无菌；所有东西现配现用；动作轻柔；有针对性地做温度梯度、引物梯度、模板浓度梯度 实验室现有的PCR仪 细节决定成败公用平台的维护，人人有责 谢谢大家！ PCR的经验总结 ——中心实验室 内容提要： PCR的简介 PCR的原理 PCR的操作步