菊花组织培养的心得体会.docVIP

菊花组织培养的心得体会 一、植物组织培养概念：是指将植物的离体器官。组织或细胞在人工控制的环境下培养发育 再生成完整植株的技术。 二、组培基本原理：植物组织培养的理论基础是建立在细胞全能性的概念上，植物细胞全能性的表达要经过一个从分化状态到脱分化的愈伤组织的中间形式，然后进入再分化和再生的阶段。 植物细胞全能性的表达一般要经历的过程为： 外植体 愈伤组织 生长点 根、芽的分化或细胞胚的发生 小植株 三、方法与步骤：1、用自来水清洗菊花枝条表面的浮尘和脏物 2、操作者手及超净台用70%的酒精进行消毒 3、向装有枝条的烧杯中倒入70%的酒精，轻轻摇晃，浸泡6-9秒，将酒精去除，用无菌水冲洗3次 4、向烧杯中加入0.1%的HgCL，轻轻摇晃，浸泡5-10min,然后将HgCL去除，用无菌水至少冲洗3次 5、将解剖刀、镊子灼烧灭菌后，将枝条在无菌培养皿上切出叶片、茎段。 6、将培养瓶打开（瓶口稍加灼烧），将叶片、茎段接种在培养瓶表面，盖上封口膜（全过程均在无菌环境下操作） 7、置于24-25。C下培养箱中进行培养（一周后观察） 四、培养条件2RH-25DGSbI（强光型）：周期/段数2，小时/分钟14，温度24，湿度55 五、实验结果：共培养17瓶，1、发芽：6瓶（其中NAA 0.3mg/l,6-BA 2mg/l 1瓶；NAA 0.2 mg/l,6-BA 1 mg/l 2瓶；NAA 0.4 mg/l,6-BA 2 mg/l 1瓶；NAA 0.2 mg/l,6-BA 2 mg/l 2瓶） 2、染菌：4瓶（其中3瓶长愈伤组织后染菌，1瓶完全染菌） 3、未生长：7瓶（其中2瓶叶片直接干枯变褐色死去） 六、分析总结：在此实验中共进行了三次重复实验，其第三次实验稍佳，重复实验第二次时培养基在未接种过程则已有染菌情况。出现以上结果经分析其原因有： 1、未接种培养基染菌原因：（1）在配制培养基过程中，水加热至沸腾时，加入琼脂搅拌时未待琼脂调制澄清，就向其中加入了无机离子及蔗糖，导致培养基出现颗粒状沉淀。 （2）培养基在高温灭菌锅中进行灭菌时，其时间不足或过长，导致其培养基灭菌不彻底。 2、接种后未生长原因：（1）在接种过程中，用镊子接种叶片时，镊子在灼烧灭菌后，冷却时间不足，导致植物细胞大面积烫伤或烫死。 （2）激素、培养基中的营养不足抑制其生长或生长缓慢。 3、接种后叶片生长一段时间后染菌原因：（1）菊花枝条灭菌时，使用酒精和HgCL对其进行灭菌浸泡时某些叶片可能接触不均匀，导致灭菌不彻底。 （2）在接种环节中，在打开培养瓶时，未在酒精灯火焰旁，以及培养瓶口未在酒精灯上稍加灼烧灭菌，导致空气中的细菌进入培养瓶造成染菌情况。 （3）在接种完成后，盖封口膜时未在火焰旁，致使空气中的细菌进入了培养瓶造成了染菌。 （4）植物在形成了愈伤组织后，由于植物类生菌的出现，导致其染菌。 在此次的菊花组织培养实验中，让我受益匪浅，因为整个操作的关键部分在于“无菌”，每一环节都要严格把关，起初的自己总是手忙脚乱，第一次实验时在使用镊子进行接种菊花叶片、茎段时发现自己手都在不自主的颤抖，但经历三次重复实验后，逐步熟练了其操作步骤。但由于实验的关键在于严格的无菌条件，所以在实验过程还得牢牢的把握好每一步的灭菌条件。稍有不甚，可能就会造成其结果出现染菌状况。