2-7动物微生物--病料的触片染色及细菌的分离培养（实验三）.pptVIP

实验三病料的触片染色及细菌的分离培养 一.实验目的与要求 1.培养无菌操作的意识 2.掌握病料的正确触片及美兰染色方法 3. 掌握病料细菌分离的操作步骤及其分区划线 二.实验仪器及材料 1. 仪器：恒温箱、显微镜等 2 .实验材料： 培养基：麦康凯培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） 病料：猪肺、肝脏、脾脏等 酒精灯、接种环、剪刀、接种环、镊子等 染色液：美兰染色液 三.内容与方法 1.病料触片染色：灼烧剪刀、镊子从病料上剪取小块组织→→用新鲜切面在干净载玻片上轻触3～4个 触面→→自然干燥→→美兰染色。 2.美兰染色步骤：触片经过火焰固定→→滴加适量美兰染色液覆盖涂面→→染色3分钟→→晾干→→镜检→→菌体呈蓝色。 用灭菌的烙刀（趁热）对病料的表面进行灭菌 →→ 用灭菌的剪刀在病料上灭过菌的地方剪一切口 →→ 接种环灭菌，从切口取细菌 →→ 无菌操作进行平板分区划线 →→ 用过的剪刀、镊子、烙刀、接种环等烧灼灭菌 →→ 平板放入恒温箱中 18-24 小时 →→ 观察培养后的细菌菌落性状。 4.分区划线 ① 右持接种环，烧灼冷却后，蘸取划线。 ② 左手抓握琼脂平板，在酒精灯火焰左上方，使平板面向火焰，右手将已沾的病料接种环在琼脂表面分区划线 ③ 划线完毕，将接种环烧灼。 ④将平板倒扣并做标记，培养。 划线及其结果 四.结果及分析讨论 1 病料触片染色结果及其分析 2 细菌培养结果及其分析 五.注意事项 1 病料触片不易过厚 2 无菌意识 3 分区划线时小心划破培养基 4 病料正确处理 5 病料采集的时间，及运输保存 六.作业 1.撰写试验报告，下次上实验课时交。 2.考核：涂片老师看后，当场打分（5分） 3.卫生：包括实验结束后实验及地面卫生，显微镜等实验仪器及试剂摆放是否标准（5分）。 4 .病料中细菌分离培养的步骤？ 5 .如何做好平板的分区划线？ 培养基的制备 1 肉膏汤培养基 成分：牛肉膏1g，蛋白胨1g，氯化钠1g，蒸馏水200mL。 制法：将牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，加蒸馏水至200mL，矫正 PH7.4～7.6, 121.3℃灭菌20min即可. 2 营养琼脂培养基 成分：牛肉膏1g，蛋白胨1g，氯化钠1g，琼脂粉5g，蒸馏水200mL。 制法：将上述成份用水溶解后，矫正PH7.4～7.6, 121.3℃灭菌20min即可，冷却到不烫手，倒平板。 棉塞﹑棉球制备及玻璃器皿清洗 1.棉塞制备：每人制一个 2.棉球制备：每人制50个 3.玻璃器皿清洗 2%盐酸浸泡过夜清水冲洗2次，烘干。参考课本227页。 灭菌锅 原理：在密闭的蒸锅内，蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 。 注意：灭菌锅内冷空气要排除：原因空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度 使用步骤 1 将内层灭菌桶取出，加入适量的水。 2．放回灭菌桶，装入待灭菌物品。3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。 4.0.05MPa时切断电源排气。 5 继续加热至121.3℃，时开始计时20-30min. 6压力降为0时放气打开。 作业 高压灭菌锅的使用原理。 * * 3.病料中细菌的分离培养： 分区划线 有单菌落 划线模示图 有单菌落 补充 补充 补充 安全阀 放气阀 压力表 设定时间温度按键 盖子 补充 补充 补充 补充 *