fk506对高糖培养大鼠视网膜müller细胞生物学特性的影响word格式论文.docxVIP

FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响中文摘要第一部分视网膜Müller细胞的培养及FK506半数抑制率研究目的:培养、鉴定视网膜Müller细胞，检测FK506对视网膜Müller细胞的IC50，为FK506 对Müller 细胞的生物学作用研究提供实验基础。方法:采用含10%胎牛血清的DMEM培养基(含D-葡萄糖5.5mmol/L)，培养大鼠永生化视网膜Müller 细胞。Müller细胞培养12、24、48h 倒置显微镜下观察Müller 细胞形态并照相记录。以谷氨酰胺合成酶(GS)免疫细胞化学染色鉴定。MTT法检测FK506作用于视网膜Müller细胞的生长抑制率。结果:光镜观察见Müller细胞呈典型的多角形，细胞大小均匀，细胞边界清晰，形态无明显差异。Müller细胞GS 抗体免疫细胞化学染色(+)，细胞质中和细胞膜上出现棕黄色、棕褐色颗粒状或者网状物质。MTT 法检测Müller 细胞的生长抑制率，FK506IC50=75pg/ml。结论:Müller 细胞生长良好，FK506的IC50=75pg/ml。关键词:Müller 细胞，FK506，生长抑制率第二部分FK506对高糖培养视网膜Müller细胞VEGF表达的影响目的:采用FK506 干预大鼠视网膜Müller细胞，观察其对Müller细胞VEGF基因表达的影响，从而探讨FK506对高糖培养的视网膜Müller 细胞中VEGF基因表达的调控作用。方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D-葡萄中文摘要FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller 细胞生物学特性的影响糖浓度5.5mmol/L+FK506 75pg/ml）, 高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK506 75pg/ml）。ELISA 检测FK506对常规和高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞上清中VEGF的表达。RT-PCR检测Müller细胞中VEGF基因的表达。结果:ELISA 检测各组Müller细胞中VEGF浓度：结果表明高糖组比正常对照组细胞上清中VEGF的表达浓度升高（P0.05）。在高糖+FK506组较单纯高糖组细胞上清中VEGF的表达浓度降低（P0.05）。RT-PCR检测各组的光密度值：高糖组较正常对照组的视网膜Müller细胞VEGF 基因mRNA的表达增高（P0.05）；高糖+FK506组较高糖组VEGF基因mRNA的表达降低（P0.05）。结论:FK506 可抑制高糖培养的视网膜Müller细胞VEGF的表达。关键词:FK506，视网膜Müller细胞，VEGF, 高糖第三部分FK506对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响目的:观察FK506 对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。实验分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D- 葡萄糖浓度5.5mmol/L+FK50675pg/ml）, 高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK506 75pg/ml）。流式细胞仪检测视网膜Müller 细胞凋亡比例。免疫细胞化学染色检测FK506对常规及高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞中的P53、Bcl-2、Fas 及caspase-3 表达的影响。结果: FCM 检测各组凋亡比例：提示高糖组较正常对照组的凋亡比例明显上升(P0.05)；高糖+FK506 组比高糖组的视网膜Müller细胞的凋亡比例下降(P0.05)。免疫细胞化学染色检测各组的OD值：a.高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas 及caspase-3的表达较正常组升高（P0.05）；FK506+高糖组比高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas 及caspas的表达明显降低（P0.05）。b. 高糖组视网膜Müller细胞Bcl-2 的表达较正常组降低（P0.05）；FK506+高糖组比高糖组视网膜Müller细胞Bcl-2 的表达明显升高（P0.05）。结论:FK506 可抑制高糖培养的大鼠视网膜Müller细胞的凋亡。关键词:FK506；视网膜Müller细胞；凋亡；高糖作者：夏蔚指导教师：张晓峰Thestudyon theeffectofFK506 on thebiological behaviors ofratMüller cells cultured in hig