微生物血球计数板直接计数法和测微技术.ppt

实验七 微生物血球计数板直接计数法和测微技术  一. 实验目的 二、基本原理 1．血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的又被一短的横槽隔成两半，每边平台上刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室。每个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3（1×10-4ml）。计数时通常统计5个中方格的细菌数，再换算成1ml菌液中的细菌数。 1.酵母菌显微直接计数 2．测微尺的使用原理 测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm分为100格，每格0.01mm（即10μm），用于校正目镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，分50和100两种，通过镜台测微尺校正后，可用于测量细菌的大小。 2.测定细胞的大小测定的工具：目镜测微尺、镜台测微尺 实验材料 1．菌种 啤酒酵母，金黄色葡萄球菌， 枯草芽孢杆菌等。 2．仪器或其他用具 血球计数板，显微镜，盖玻片，载玻片，目镜测微尺，镜台测微尺，无菌毛细滴管等。 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半 1)目镜测微尺的校正：校正并计算10×、40×、100 ×镜目镜测微尺每小格实际的长度 2)酵母菌体大小的测定：用于计数的啤酒酵母菌的制片置于载物台上，在40×镜下用目镜测微尺测量并计算菌体的长和宽。 3)金黄色葡萄球菌和枯草杆菌大小的测定： 将金黄色葡萄球菌和枯草杆菌分别进行简单染色后，选取5个菌体在油镜下分别测定其直径和长度、宽度并计算其大小 实验结果 1.目镜测微尺标定结果 10 × 、40×、100 ×镜目镜测微尺每格长度是 μm。 2. 显微计数结果 记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。 问题与讨论 1、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行效正？P48 (1)  2、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2中可行的检测方法。P92(2) 上次试验习题解答 1、你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？ P46，（1） 四种霉菌的异同如下：曲霉，外生孢子（分生孢子），有足细胞，菌丝有隔；青霉：外生孢子（分生孢子），为扫帚状，菌丝有隔，相对较细；根霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔，有匍匐枝和假根；毛霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔。 请确保血球计数板清洗干净！ * * 1．明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 2．学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法，增强微生物细胞大小的感性认识。 1ml菌液中的总菌数=A/5×25 or 16×104×B A:5个中方格中的总菌数 B：菌液稀释倍数 100倍 目镜测微尺每格长度(μm)=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数，如：(10×10/60) 1.啤酒酵母菌显微计数 2. 微生物大小的测量 菌号 三种菌的直径大小测定结果 ? 目镜测微尺格数 实际直径/μm 1 ? ? ? 2 ? ? ? 3 ? ? ? 4 ? ? ? 5 ? ? ? 均值 ? ? ? ? 各中格中菌数 A B 二室平均值 个/ml 1 2 3 4 5 第一室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第二室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2、你认为在显微镜下，细菌，放线菌，酵母菌和霉菌的主要区别是什么？P46，（2） 细菌较小，一般球状、杆状等，需要使用油镜进行观察。酵母菌比细菌大，一般椭圆形，出芽生殖。放线菌、霉菌为丝状，霉菌的菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗得多（约为3-10微米），常是细菌菌丝体宽度的几倍至几十倍。