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色谱分离技术 一、色谱分离原理 历史、色谱分离过程、分类 色谱流出曲线、色谱图及相关术语 色谱法基本原理 描述分配过程参数、峰间距、峰形状和峰宽的理论描述(塔板理论及速率理论) 分离度及色谱分离方程 分离度及色谱分离方程、影响分离的因素 1.概述 （1）历史 20 世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取； 现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段，其应用涉及每个科学领域； 1906年，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先发明。他采用填充有固体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素 chlorophylls xanthophylls)加于柱顶端，然后以溶剂石油醚淋洗，被分离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱 (希腊语中“chroma”=color; “graphein”=write) ； 50年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术的发展；复杂组分分析发展的要求； 1957-1972年，15年中有12个Nobel奖是有关色谱研究的。 （2）色谱法定义 色谱法是利用各组分在两相中具有不同的分配系数或吸附系数而使混合物中各组分进行分离的技术。试样中各组分在称之为色谱（分离）柱中的两相间不断进行分配。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力（溶解或吸附）的大小、强弱不同，各组分被固定相保留的时间不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，按一定次序从色谱柱中流出。 与适当的柱后检测方法结合，即可实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。 （3）分离原理 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。样品中各组份在两相中进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，反之，与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个单组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。 （4）色谱法的分类 1）按固定相外形分 柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱）。 2）按组份在固定相上的分离机理分 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）：不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。 3)按两相状态分： （5）色谱法的特点 ①分离效率高。对于十分复杂的混合物或性质极为相近的物质如有机同系物、异构体、同位素等能够进行分离和准确的定性定量，而且分离效能是其他分离技术无法比拟的。 ②分析灵敏度高。可检测μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。 ③分析速度快。一般在几分钟～几十分钟内可以完成一个试样的分析。 ④应用范围广。气体、液体或固体；有机、无机甚至具有生物活性的物质均可分析，是目前分离和分析复杂组分最有效的手段。 （6）色谱法的局限性 色谱的分离与分析必须有已知纯物质作为对照品，否则就难以判断某一色谱峰代表的物质。因此，利用色谱法对未知物质进行单独定性较为困难。采用色谱-质谱、色谱-红外光谱、色谱-核磁共振等联用技术，将色谱高效分离效能与其他定性性能强的仪器相结合可有效克服这一缺陷。 2.色谱图及其相关术语 （1）色谱图 混合物中各组分经色谱柱分离后随流动相依次流出色谱柱，检测器把组分的浓度信号转变成电信号。色谱图就是组分在检测器上产生的信号强度对时间所作的图。电信号的强度与物质的浓度成正比。色谱图就是组分浓度—时间曲线。 （2）色谱图的相关术语 ① 基线：仅有流动相通过检测器时的流出曲线，或产生的响应值 噪声：基线的上下波动 ② 峰、峰宽、峰高、峰面积 峰高：色谱峰顶点与基线的距离。 ③保留值： tM（死时间）：不与固定相作用的组分从进样到出现峰最大。值所需的时间。例如GC中空气的出峰时间。它与色谱柱的空隙体积成正比。由于物质不与固定相作用，所以其流速与流动相流速相近，因此据tM可求出流动相的平均速度：（t0） tR （保留时间）：组分从进样到出现峰最大值所需的时间。对于固定的操作条件和固定的色谱柱，一个组分只有一个tR值。它包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。 t′R′（调整保留时间）：某组份的保留时间tR扣除死时间tM后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时