低能荷水平下加强(葡萄糖)磷酸化提高光滑球拟酵母糖酵解速度.pdfVIP

低能荷水平下加强葡萄糖磷酸化提高光滑球拟酵母糖 酵解速度1 * * 刘立明 ，许庆龙，陈坚 江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 (214122) E-mail ：jchen@ , mingll@ 摘 要：通过添加己糖激酶抑制剂Cibacron Blue 3G-A降低T. glabrata 己糖激酶(HK)活性使得 葡萄糖消耗速度下降，表明由HK所催化的葡萄糖磷酸化过程在糖酵解中起着关键作用。Mg2+ 需与胞内ATP形成Mg-ATP复合物才能激活HK活性。将菌株CCTCC M202019和N07 经NTG 诱变处理后获得HK活性均提高45%的突变株DGR09和DN11 。尽管突变株DGR09 中HK活性 提高45% ，葡萄糖磷酸化能力提高45.3% ，胞内葡萄糖含量降低42.4% ，但并不能提高葡萄糖 消耗速度。而突变株DN11 中己糖激酶活性同样提高45.3% ，但葡萄糖消耗速度提高了16.2% (菌株N07) 、51.9%(菌株CCTCC M202019)和49.4%(菌株DGR09)。这一结果表明，在降低细 胞能荷水平的基础上提高HK活性和葡萄糖磷酸化能力促进了T. glabrata葡萄糖消耗速度的 提高。 关键词：光滑球拟酵母，葡萄糖磷酸化，糖酵解，己糖激酶 在酵母细胞中，己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK) 已被证实是影响 糖酵解速度的关键因素[1-5] 。然而，在原核生物或者真核生物中过量表达单一或者多个关键 酶的活性并不能有效地提高糖酵解速度[6-10] 。刘立明等已证实，光滑球拟酵母中糖酵解速度 受胞内能荷水平和 NAD+水平所调控[11] 。在保证 NADH 充分氧化的条件下适当削弱光滑球 拟酵母的能量代谢能有效加速其酵解。然而，前期研究结果表明，尽管降低细胞能荷和提高 + NAD 水平能有效地提高糖酵解速度，但提高幅度不大。酶学性质分析表明，降低细胞中ATP 水平解除了高能荷对 PFK 和 PK 的反馈抑制，提高了 PFK 和 PK 的活性，但降低细胞能荷 并不影响己糖激酶的活性。 图 1 己糖激酶催化葡萄糖磷酸化 Fig.1 Glucose conversion to glucose-6-phosphate by hexokinase 己糖激酶(ATP:D-6- 己糖磷酸转移酶，EC)在 ATP 作用下催化葡萄糖磷酸化为 6- 磷酸葡萄糖，在细胞的糖酵解途径和能量代谢中起着重要作用。葡萄糖通过转运系统进入细 胞后，首先被己糖激酶 HK 在 ATP 和 Mg2+共同作用下磷酸化成 6-磷酸葡萄糖( 图 1)，反应 所需的磷酸根由 ATP 供给，这一反应不仅活化了葡萄糖，有利于它进一步参与合成与分解 1本课题得到教育部高等学校博士点基金建设专项基金(20040294003), 国家杰出青年基金和国家 自然科学基金的资助。 - 1 - [4] 代谢，同时还能使进入细胞的葡萄糖不再逸出细胞 。葡萄糖磷酸化为6-磷酸葡萄糖的生理 作用在于，6-磷酸葡萄糖能直接进入糖酵解途径，从而实现己糖物质的碳代谢和能量代谢。 因此，葡萄糖磷酸化能力的强弱和速度是影响糖酵解速度的关键性因素[12, 13] 。如不提高己 糖激酶的活性，即使降低细胞能荷水平能提高 PFK 、PK 活性，糖酵解速度也难以大幅度提 高。 在本研究中，作者希望在解除高能荷对酵解途径抑制的基础上，通过提高己糖激酶活性， 加强葡萄糖磷酸化能力，进一