中耳胆脂瘤的相关研究.ppt

中耳胆脂瘤上皮过度增殖行为与MDM2的相关性研究 * * 汪 欣 吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科 前 言 中耳胆脂瘤是耳鼻咽喉科的常见病，其主要的病理特征表现为中耳腔内鳞状上皮的高度增生和邻近骨质的破坏，以及程序性角质细胞凋亡。它具有侵袭性、破坏性、迁移性、分化变异性、复发性等类似于恶性肿瘤的生物学特征，如不及时、尽早手术治疗，可造成邻近组织的破坏及感染，进而导致各种严重的并发症甚至危及生命。 进 展 中耳胆脂瘤 组织酶学 癌基因 细胞因子 细胞角蛋白 DNA 染色体 生长因子及其受体 疑 难 问 题 中耳胆脂瘤的发生是一个复杂的过程，具体的形成机制仍不清楚，因其具有类似于恶性肿瘤的生物学特征，所以在成因及发生、发展的机制中与恶性肿瘤有很多类似的机制，但又有着根本的差别。胆脂瘤细胞增殖是受调控的，即上皮增殖增强的同时，凋亡也增强，肿瘤细胞的增殖是失控的。但有关胆脂瘤上皮细胞增殖和凋亡之间的关系以及胆脂瘤的骨破坏机制尚不十分清楚，有待于人们进一步探讨研究。 p53 MDM2 P53激活 诱导 MDM2 MDM2 P53 P53激活 复合物 抑制 MDM2 下调 p53 减弱抑制 抑制 背 景 收集2000年6月至2003年12月间本院手术标本32例，经临床和病理检查确诊为后天继发性胆脂瘤。其中男性18例，女性14例，年龄16-56岁，平均年龄32.5岁。同时取正常外耳道皮肤12例做正常对照。 临床资料 免疫组化方法采用SP法，步骤如下： 1、切片常规脱蜡，充分水化； 2、PBS冲洗3次，每次5 min； 3、3%过氧化氢甲醇溶液孵育，室温10 min，以阻断内 源性过氧化物酶的活性； 4、PBS冲洗3次，每次5 min； 5、0.1%胰蛋白酶 37℃消化20 min； 6、PBS冲洗3次，每次5 min； 7、0.01M 枸橼酸盐缓冲液PH6.0加热92℃，抗原修复 8、蒸馏水冲洗3次，每次5 min，PBS浸泡5 min； 9、10%非免疫性山羊血清，室温下10 min； 实验方法 10、吸去多余的血清，滴加适当稀释的第一抗体，4℃ 过夜； 11、PBS冲洗3次，每次5 min； 12、滴加生物素标记的 第二抗体，37℃孵育30 min； 13、PBS冲洗3次，每次5 min； 14、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃孵育 30 min； 15、PBS冲洗3次，每次5 min； 16、滴加新鲜配制的DAB，显微镜下观察掌握染色情况； 17、自来水冲洗，苏木精复染核，中性树胶封片。 免疫组化染色过程中，用PBS代替一抗做阴性对照。 实验方法 结 果 图1 MDM2 在中耳胆脂瘤免疫组化染色 MDM2阳性细胞为棕黄色，分布于胆脂瘤上皮全层细胞 (SP ×400) 结 果 图2 MDM2 在正常外耳道皮肤免疫组化染色 正常外耳道皮肤无MDM2阳性颗粒分布(SP ×400) 结 果 表1 MDM2在中耳胆脂瘤上皮组织中表达（灰度值） ① MDM2蛋白的高表达从胆脂瘤上皮的基底层 向外逐渐增强，基底层表达最少，颗粒层和 角质层表达最强。 ② 结合以往有关p53基因表达结果，我们推测 MDM2在胆脂瘤组织中的高表达，可能是由 于细胞中野生型p53基因激活诱导的。 讨 论 ③ 但是在胆脂瘤组织中出现p53和MDM2在胆脂 瘤的棘层、颗粒层共存的现象，表明MDM2没 有通过结合p53蛋白，使p53功能丧失。我们推 测胆脂瘤上皮的过度增殖和凋亡可能存在 p53/MDM2反馈环调节失常，主要是棘层和颗 粒层细胞的调节失常。 ④ 基底层细胞中MDM2的低表达，表明MDM2 与p53结合形成的复合物减少，导致p53表达的 增强，推测基底层细胞可能保持正常的 p53/MDM2反馈调控，这可能