应激性生殖内分泌功能低下动物模型_论文.docxVIP

应激性生殖内分泌功能低下动物模型 摘要　目的：观察应激对动物生殖内分泌的影响，建立符合临床需要的生殖内分泌紊乱的动物模型。方法：用悬吊和制动方法造成动物急性或重复应激状态，用放射免疫结合的方法测定血浆有关性激素的水平，用阴道涂片的方法观察雌性动物的性周期，用常规方法观察雄性动物的性行为。结果：急性制动应激和急性悬吊应激1，2，3 h均能使雄性小鼠血浆睾酮水平显著降低,皮质酮水平则明显升高。大鼠急性制动应激3 h，可见血浆睾酮水平及睾丸中合成酶17α-羟化酶、17,20-羟甾脱氢酶和3β-裂解酶活性显著降低，皮质酮水平则明显升高。重复悬吊应激可使雄性小鼠性行为低下或缺损，雌性小鼠性周期紊乱，分别可见血浆睾酮和雌二醇水平降低。结论：应激可使生殖内分泌功能低下或紊乱，在此过程中性激素降低起着重要的作用。提示临床上各种躯体或心理应激引起的生殖内分泌功能低下或紊乱也与相关性激素降低或分泌节律失常有关,应激性生殖内分泌功能低下或紊乱动物模型可供相关药物研究。 应激是指内外环境剧变刺激时，机体出现的包括精神、神经、内分泌和免疫系统等的综合应答状态。强烈身心应激尤其是长期慢性应激严重影响着人类的身心健康，导致临床疾病、亚健康状态及早衰［1,2］。 生殖内分泌系统对应激刺激尤为敏感，月经失调、高雄激素血症、闭经、不孕、男女性功能障碍等均与身心应激密切相关［3～8］。在“生物医学模式”向“生理、心理和社会医学模式”转变的今天，应激方法尤其是心理应激方法在相关药物研究中具有十分重要的作用。现将几年来我们建立的及国外应用较多、可操作性强的有关应激性生殖内分泌功能低下模型作一介绍［9～11］。 材料与方法 1　急性应激性睾酮水平低下模型 小鼠制动应激性睾酮水平低下模型　取性成熟昆明种小鼠，体重36～38g，室温20～23℃，光照（14h光∶10h暗），适应环境3d, d4上午9∶00～12∶00，将小鼠置于50ml茶色瓶中，完全限制其自由活动即制动应激1～3h，应激期间不影响动物自由呼吸。应激结束即刻取血，肝素抗凝，分离血浆，用放射免疫结合方法测定血浆睾酮及皮质酮水平。 小鼠悬吊应激性睾酮水平低下模型　取性成熟昆明种小鼠，体重36～38g，室温20～23℃，光照（14h光∶10h暗），适应环境3d, d4上午9∶00，以小鼠尾部为支点，将其悬吊于水面上，水温(25±1)℃，水深20 cm，悬吊高度以小鼠前肢刚接触水面为度，悬吊时间1～3 h，应激结束即刻取血，肝素抗凝，分离血浆，用放射免疫结合方法测定血浆睾酮及皮质酮水平。 大鼠制动应激性睾丸功能低下模型　取性成熟SD大鼠，体重230～250g，室温20～23℃，光照（14h光∶10h暗），适应环境3d, d4上午9∶00将动物置于透明的聚乙烯圆锥形的制动应激装置中，使头部朝圆锥方向，圆锥大小以完全限制动物活动为度，位于动物鼻部的圆锥体处，开一直径1 cm的孔，以保证动物自由呼吸，如此应激3 h 。 2　重复应激性生殖内分泌功能低下模型 重复应激性小鼠性行为低下动物模型　取性成熟昆明种小鼠，体重36～38g，室温20～23℃，光照（14h光∶10h暗），适应环境3d。悬吊方法同前，悬吊1次/d，连续12d，并通过循序延长悬吊时间增加应激强度, d1～d3悬吊2h/d，d4～d6悬吊3h/d，d7～d9悬吊4h/d，d10～d12悬吊5h/d，每天应激时间安排在上午9∶00～下午2∶00。d6下午7∶00～9∶00开始观察每天应激后及末次应激恢复24h后15 min内性行为，即舔吻、跨骑、交配的潜伏期、发生数及发生率,部分动物于末次应激后30 min取血，肝素抗凝，分离血浆供血浆中睾酮及皮质酮水平测定。 重复应激性雌小鼠性周期失常、雌二醇降低模型　取性成熟昆明种雌性小鼠，体重34～36g，室温20～23℃，光照（14h光∶10h暗），每天上午7∶30～8∶30阴道涂片，连续15d。选择有规律性周期的动物，悬吊方法同前，悬吊1次/d，连续12d，并通过循序延长悬吊时间 增加应激强度，d1～d3悬吊1h/d,d4～d6悬吊2h/d,d7～d9悬吊3h/d，d10～d12悬吊4 h/d。每天应激时间安排在上午9∶00～12∶00。应激期间继续每天阴道涂片，观察性周期应激性变化。于应激后第2个动情期，取血，肝素抗凝，分离血浆，用放免法观察血浆中雌二醇水平应激性变化。 结　果 1　急性应激性睾酮水平低下模型 急性制动应激和悬吊应激1,2,3 h均能使小鼠血浆睾酮水平显著降低，相反，皮质酮水平则显著升高。急性制动应激3 h可使大鼠血浆睾酮水平及睾丸中睾酮合成酶17α-羟化酶、17,20-裂解酶和3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)活性显著降低，而血浆皮质酮水平明显