VEGF-B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响案例实例.ppt

欢迎各位专家老师莅临指导;VEGF-B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响 ;前 言;原发性肝癌与VEGF-B 最常见的恶性肿瘤之一，发病率升高，恶性程度高，进展迅速，易侵袭、转移、复发。 肿瘤生长和转移依赖于肿瘤血管新生。 血管内皮生长因子家族成员(vascular endothelial growth facter family members, VEGFs)是影响肿瘤血管新生的关键因子之一。 VEGF-B是VEGF家族新成员， 在原发性肝癌等恶性肿瘤中存在高表达，目前研究表明VEGF-B可协同VEGF-A和其他血管生成因子，在肿瘤血管新生中发挥作用，但具体机制仍知之甚少。 ; ; ;实 验 技 术 路 线;材 料 与 方 法;细胞培养试剂;VEGF-B靶向siRNA表达载体质粒 Invitrogen公司 LipofectamineTM 2000 Invitrogen公司 杀稻瘟菌素(blasticidin) Invitrogen公司 OPTI-MEM GIBCO公司;RNA提取和RT-PCR试剂 ;氯仿 北京化学试剂厂 异丙醇 北京化学试剂厂 乙醇 北京化学试剂厂 焦碳酸乙二酯(DEPC) 美国Amresco公司 琼脂糖 美国promega公司 DNA Maker(1100) 美国promega公司 琼脂糖 美国promega公司 溴化乙锭 (EB) sigma公司 ;仪器;电子分析天平JA 5003型 移液器 涡旋混匀器XH-B型 电泳仪DYY-6C型 电泳槽DYCZ-38B型 倒置荧光显微镜TE2000-U型 电热恒温干燥箱 恒温水浴箱HXS-H型 裸鼠饲养笼(美国克罗多拉州生产);实验方法;统计学方法;结 果;Fig.1 Image of fluorescence microscopy in HepG2 cell at 48h after transfected with control of pcDNATM6.2-GW/ EmGFP-miR. a: in nomal field, ×100; b: in fluorescent field, ×100; c: in nomal field, ×100; d: in fluorescent field, ×100. ;Fig.2 Nude mice on day 35 after inoculated with HepG2 cells transfected stably with VEGF-B siRNA expression plasmid.;Fig.4 subcutaneous implanted tumor of nude mice. a: control group, b: experimental group.;Fig.3 The bar charts are expressed as the average tumor volume and tumor weight in every group. *compared with Ps0 group, P0.05.;Fig.4 Expression of VEGF-B mRNA in different transfected groupings was detected by RT-PCR. M: Marker; 0: Ps0 group; 1: Ps1 group; 2: Ps2 proup; 3: Ps3 group.;Fig.5 The bar charts are expressed as the IOD ratio of VEGF-B and β-actin in every group. *compared with Ps0 group, P0.05.;Table1 The effect