第九章 色谱法概论-2.pptVIP

第九章 色谱法概论 重点 1.色谱法分类：按流动相分类、按分离原理分类、按操作形式分类、按分离目的分类。 2.色谱图及常用术语：半峰宽、基线宽度、保留时间、保留体积、拖尾因子、相对保留值、分配系数、容量因子、保留因子。 色谱分析法简称色谱法或层析法（chromatography)，是一种物理或物理化学分离分析方法。 原理：利用物质在流动相与固定相之间的分配系数差异而实现分离 色谱法与光谱法的区别： 色谱法具有分离及分析两种功能，而光谱法不具备分离功能；色谱法是先将混合物中各组分分离，而后逐个分析，是分析混合物最有力的手段。 一、色谱法的由来 1．1906年由俄国植物学家Tsweet创立色谱法 分离植物色素时采用。 他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 植物色素分离见图示 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 概述 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 色谱法 三 色谱法的分类 按流动相与固定相的分子聚集状态分类： 气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）和超临界流体色谱法（SFC）。 续前 2．按固定相的固定方式分： 3．按分离机制分： （1）吸附色谱法 以吸附剂作为固定相，有机溶剂作为流动相，利用样品中不同组分在吸附剂上吸附能力的差别，而进行分离分析的一种色谱方法。 （2）分配色谱法 以液态的溶剂（通常把这种溶剂又叫固定液均匀地涂布在载体的表面）作为固定相，与之不相混溶的另一溶剂作为流动相，利用样品中不同组分在这互不相溶的两相中溶解度（分配系数）的差异，而进行分离分析的一种色谱方法。 （3）键合相色谱法 将有机分子（固定液）通过适当的化学反应以共价键的形式结合在载体（支持剂）的表面，所制备的固定相称为化学键合固定相。使用化学键合固定相的色谱方法称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱法。 （4）空间排阻色谱法 以凝胶（有机高分子的多孔聚合物）作为固定相，有机溶剂或水溶液作为流动相，利用样品中不同组分的分子尺寸的差异进行分离分析的一种色谱方法，称为空间排阻色谱法或凝胶色谱法。 （5）离子交换色谱法 以离子交换剂作为固定相，水溶液作为流动相，利用样品中不同组分（离子性化合物）的交换能力的差别而进行分离分析的一种色谱法称为离子交换色谱法。 四、色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 第2节 色谱过程与术语 一、 色谱过程： 色谱过程是当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 以吸附色谱为例见图示 吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 图示 分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出back 色谱过程示意图 二、色谱流出曲线和基本概念 1．流出曲线和色谱峰 2．保留值：色谱定性参数 3．色谱峰的区域宽度：色谱柱效参数 1．流出曲线和色谱峰 流出曲线（色谱图）：电信号强度随时间变化曲线 色谱峰：流出曲线上突起部分 从色谱图上可以得到许多重要信息： ①根据色谱峰的个数，可以判断试样中所含组分的最少个数。 ②根据色谱峰间的距离，可评价色谱条件的选择是否合理。 ③利用色谱峰的保留值及区域宽度，可评价柱效。 ④根据色谱峰的保留值，可以对组分进行定性分析。 ⑤根据色谱峰的面积或峰高，可以对组分进行定量分析。 基本概念 （1） 正常峰的判断 对称因子fS（symmetry faxtor）或叫拖尾因子 对称因子在0.95～1.05之间为对称峰；小于0.95为前延峰；大于1.05为拖尾峰。 基本概念（2） 2.??? 基线：在操作条件下，没有组分流出时的流