糖类结构鉴定.docVIP

单糖组分（连玉红） 标准样品的配制：取葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸10 mg，加5ml水配成2mg/mL的溶液。 多糖水解 取l0mg纯化后多糖，加入5mL 2mol/L的三氟乙酸(1.5mL 三氟乙酸+8.5mL 蒸馏水)，充氮气保护，封管，于120℃下水浴5 h 。反应物用氮气吹干，加入2mL甲醇重新溶解，再用氮气吹干，以充分带走TFA。 2、糖腈乙酰酯衍生物的制备 将降解后的多糖中加入5mg 盐酸羟胺，2mg肌醇，0.5ml吡啶，振荡混匀，放入90℃水浴中加热30min。 取出后冷却至室温， 加入醋酸酐0.5ml，于90℃水浴中继续反应30min进行乙酰化。将反应物用氮气吹干，加入氯仿1ml重新溶解，再用氮气吹干，反复进行3~4次。最后加入2ml氯仿复溶，供气相色谱分析使用。 3、气相色谱条件 色谱柱：OV-225-capillary column；内径：0.25mm；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度：280 ℃；进样口温度：250 ℃；载气：N2 (40 mL/min)。以单糖标准品建立GC标准图谱为参照，根据多糖完全水解样品的出峰时间和峰 面积比可知样品的单糖组成和摩尔比。 单糖组分（廖文镇） 1、水解：称取 20 mg 的雪莲果多糖于安瓿瓶中，加入4 mL 2 mol/L 三氟乙酸（TFA），用酒精喷灯对安瓿瓶进行封口后置于 105℃下反应 6 小时。反应完后，冷却至室温，将多糖水解液与适量的甲醇混合后，减压旋转蒸干，再加入适量的甲醇，减压旋转蒸干，重复 5 次以完全去除残留的三氟乙酸。 2、衍生化：往干燥后的竹荪多糖水解物中加入 0.5 mL 吡啶和 10 mg 盐酸羟胺，置于 95℃下恒温震荡反应 30 分钟，反应完后冷却，加入 0.5 mL 醋酸酐，于 95℃下进行乙酰化反应35 分钟，最终生产糖腈乙酸酯衍生物。所有的单糖标准品也按照上述步骤进行衍生化。 3、色谱条件： 色谱仪为 Dionex ICS-3000 离子色谱仪，检测器为电导检测器；色谱柱为 Carbopac PA20 柱（2×250 mm）；流速为 0.6 mL/min，柱温为 20℃，采用梯度洗脱方式：0-2 min： 100% 200 mmol/L NaOH， 2.1-20 min： 10% 20 mmol/L NaOH + 90%超纯水，20.1-40 min：100% 200 mmol/L NaOH。 单糖组分（葛玉） 分别取多糖样品各20mg置于安瓿瓶中，加入8mL 2mol/L的H2SO4，使充分溶解后封管，于烘箱中120℃水解10 h,冷却至室温，BaCO3中和，过滤去除沉淀，上清夜减压浓缩至干，然后置于P2O5干燥器中24h。将上述20mg多糖样品水解物、标准单糖各10mg及10 mg混合标准单糖在五氧化二磷干燥器中干燥24h，以0.2mL吡啶溶解，加六甲基二硅胺烷一三甲基氯硅烷(2:1)0.2 mL,于60℃烘箱中放置10 min，离心除去沉淀，进样。气相色谱条件是：OV-17毛细柱；FID检测器；气化温度180-220℃(6℃/min)；检测器温度300℃；进样口温度280℃；氮气为载气，流速46mL/min；进样量0.5 uL 单糖组分（殷君艺） 称取3-5 mg PLP-1于水解管中，加入2 mL 2 mol/L TFA，真空封管后于120℃下水解2h，冷却至室温，70℃水浴下N2挥干。分别往水解液和单糖标准品中加入10 mg盐酸羟胺和0.5 mL吡啶，再加入0.5 mL醋酐，置于90℃水浴中反应30min，得糖腈乙酸酯衍生物，过0.45 μm有机系滤膜。 GC 分析条件：DB-1701 石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，FID检测器，以N2为载气；N2流速为30mL/min，空气流速为300 mL/min，H2流速为30mL/min；检测器温度250℃，进样口温度250℃，升温程序，170℃(2min) -250℃ (10℃/min)， 250℃下保持 20 min。 多糖分子量测定（邵丽） 采用高效体积排阻色谱（HPSEC）检测多糖的纯度及其分子量分布。以不同分子量的 Dextran 为标准品，重均分子量 Mw分别为 2,500，21,400，133,800 和 2,000,000 Da。采用 Waters Ultrahydrogel TM Linear（7.8×300 mm，10 μm）凝胶柱，2 柱串联；检测器：Waters 2410 示差折光检测器和紫外检测器；流动相：0.1 mol/L NaNO3；流速：0.9 mL/min；柱温：45℃；上样体积：20 μL。多糖样品配成 0.2 mg/mL 溶液，过