生物发酵预处理.pptVIP

生物反应过程示意图 一般流程 预处理的目的 预处理的方法 胶体双电层结构 絮凝剂的吸附架桥作用 常用的絮凝剂 絮凝作用的影响因素： 二、发酵液的固液分离 影响固液分离的因素 过滤 改善过滤方法 分离设备 板框压滤机 错流过滤 平抛式 平抛式 多室式 多室 螺旋式 螺旋式 碟片式 碟片式离心机 碟式 思考题 平抛式：瓶式离心机，实验室常用的低\中速离心机，转速一般在 3000-6000rpm。 离心 若干同心圆筒组成若干同心环状分离室 增加沉降面积，减少沉降距离。 悬浮液中的粗颗粒沉降到靠近内部的分离室壁上，细颗粒则沉降到靠近外部的室壁上，澄清的分离液经溢流或由向心泵排出。 常用于抗菌素液－液萃取分离，果汁和酒类饮料的澄清等。 螺旋卸料沉降离心机 卧螺机是一种全速旋转，连续进料，分离和卸料的离心机。 操作温度可达300℃ 操作压力一般为常压 常用于胰岛素，细胞色素，胰酶的分离等。 是一种应用最为广泛的离心机 有一个密封的转鼓，内装十至上百个锥顶角为60~100゜锥形碟片。 固体的沉降距离极短，分离效果较好。 碟片间的距离一般为0.5~2.5mm,与被分离物料的性质有关。 人工排渣的碟片离心机 喷嘴排渣的碟片离心机 活门（活塞）排渣的碟片离心机 活门排渣的喷嘴碟片式离心机（这是近年来开发的机型，它和相同直径的活塞机相似，其速度可增加23%~30%,故可使分离因素达15000 左右，该机型可用于酶制剂，疫苗和胰岛素生产中分离物的澄清，醇的生产中细菌的采集以及r-DNA中采集和澄清。 * * 原料液 细胞分离(离心，过滤) 细胞－胞内产物 路线一 路线二 细胞破碎 碎片分离 路线一A 路线一B 清液－胞外产物 粗分离(盐析、萃取、超过滤等) 纯化(层析、电泳) 脱盐(凝胶过滤、超过滤) 浓缩(超过滤) 精制(结晶、干燥) 包含体 溶解(加盐酸胍、脲) 复性 发酵液的预处理和固液分离 一、发酵液的预处理 发酵液的组成？ 菌（细胞）体，胞内外代谢产物， 胞内的细胞物质及剩余的培养基残分等。 液体的基本特性 ①可压缩性，黏度大 ②悬浮状态稳定 ③所需的产品在培养液和菌体中浓度很低 ④存在许多杂质 ⑴改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离器的效率； ⑵尽可能使产物转入便于后处理的一相中（多数是液相）； ⑶去除发酵液中的部分杂质，以利于后续各步操作。 ⑴加热 ⑵调节悬浮液的PH值(草酸，无机酸或碱) ⑶凝聚和絮凝 (4)杂蛋白质的其它去除方法 (5)去除高价无机离子 凝聚与絮凝：将化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使其聚集起来,增大体积以便固液分离,常用于菌体细小而且黏度大的发酵液预处理中。 凝聚和絮凝 发酵液的带电现象 细胞或菌体表面带有负电荷 → 吸附溶液中正离子 热运动 →正离子均匀分布到液体中，具有离开胶 粒表面的趋势 stern平面以内，正离子被紧密束缚在胶核表面， 称为吸附层或stern层； stern平面以外，正离子在溶液中扩散，距离越 远，浓度越小，最后达到主体溶液的平均浓度， 称为扩散层。这样就形成了双电层的结构。 凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类或石灰等）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１ mm 大小块状凝聚体的过程。 胶体粒子(10-100nm) →大粒子（1mm） 机理： a 中和粒子表面电荷  b 消除双电层结构 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力： A13＋＞Fe3+ ＞H＋＞Ca2十＞Mg2+＞K+＞Na+＞Li+ 常用的凝聚剂： Al2(SO4)3·18H20（明矾）；AlC13·6H2O； FeC13；ZnSO4；MgCO3等。 絮凝：指使用絮凝剂将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。 机理：架桥作用 ↓ 天然的和合成的大分子量聚电解质 聚丙烯酰胺（po1yacry1amide）类和聚乙烯亚胺（polyethyleneimine）衍生物 无机高分子聚合物：聚合铝盐和聚合铁盐等。 天然有机高分子絮凝剂： 壳聚糖和葡聚糖等聚糖类， 明胶、骨胶、海藻酸钠等。 微生物絮凝剂： 主要成分是糖蛋白、粘多糖、纤维素及核酸等 （1）絮凝剂用量 （2）溶液的pH （3）搅拌速度和时间 （4）助滤剂 BACK 杂蛋白质的其它去除方法 等电点沉淀 有机溶剂沉淀 蛋