酶与蛋白质工程 第4章 基因表达与蛋白质分离纯化教学讲义.pptVIP

第四讲 基因表达与蛋白质分离纯化; 蛋白质异源表达的关键问题就是发展克隆基因的表达方法，即找到理想的宿主表达系统 目前常用的表达系统有细菌表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统、哺乳动物细胞等，这些表达系统各有优缺点;基因表达体系;基因表达体系;基因表达体系;Escherichia coli; 细菌表达系统培养方法简单、增殖快、生产成本低，是目前广泛应用的外源基因表达体系。但缺乏真核细胞特有的加工处理，外源蛋白大量表达容易形成包涵体，而且在菌体中表达的外源蛋白，在原核细胞中不稳定，易被菌体蛋白酶破坏;载体分类;基因表达体系;基因表达体系;基因的融合;为蛋白质的表达和纯化提供方便 蛋白质结构和功能的研究 获得蛋白质的途径（通过体外切割） 与其它不同功能的蛋白质融合，产生新的多功能蛋白 与报告分子共表达，研究蛋白定位及转基因表达 防止外源蛋白被宿主的蛋白水解酶降解 改变胞内溶解性：硫氧还蛋白，GST 蛋白表达的空间定位：信号肽 ;基因融合的策略;若使用的linker较长，由于在重组蛋白的生产过程中对蛋白裂解比较敏感，可能会导致融合蛋白产量的降低；同时又涉及免疫原性的问题，因接头序列本身就是新的抗原 应用较短的linker虽可克服蛋白酶分解的问题，但可能使两个大分子相距最近，影响两种蛋白高级结构的折叠，从而相互干扰，导致蛋白功能丧失，linker