FQ-PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体结果.docVIP

FQ-PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体结果 【摘要】 目的：了解阳江市地区不孕不育患者解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)感染情况，探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)应用于诊治不孕不育的必要性。方法：采用FQ-PCR方法检测不孕不育患者宫颈分泌物、尿道拭子标本中的UU-DNA和CT-DNA含量。结果：238例不孕不育患者中有129例感染UU或CT（感染率54.2 %），UU和CT的感染率分别为44.5%和17.6%，混合感染率8.0%；UU和CT感染率分别为男性40.6%和25.6%，女性46.7%和13.1%；女性与男性患者UU和CT的基因拷贝数差异无显著性(P＞0.05)。结论：UU和CT是引起男女不孕不育的重要原因，UU感染率明显高于CT；FQ-PCR技术应用于诊治UU或CT泌尿生殖道感染引起的不孕不育快捷精确、安全可靠。 【关键词】 荧光定量PCR 不孕不育 解脲支原体 沙眼衣原体 感染阳性率 随着社会的发展，不孕不育症逐渐成为一个世界性难题,并且不孕不育症的发病率不断上升，不孕不育症的发病原因复杂，由于病因不同，临床症状表现也不尽相同,其治疗关键是查明病因。研究表明，衣原体、支原体的泌尿生殖系感染是造成男女不孕不育的重要因素之一。我市位处南部沿海,是一个交通便利的开放旅游城市，为了解我市不孕不育患者泌尿生殖道解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）的感染情况，我院采用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对238例不孕不育患者宫颈分泌物、尿道拭子标本的CT-DNA和UU-DNA含量进行了检测，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 资料来源 选择238例2006年3月至2007年11月就诊于我院不孕不育门诊和妇产科、结婚2 a以上夫妇性生活正常、未避孕而未曾妊娠患者，其中男86例，女152例，平均年龄30.2岁，另选同期生殖健康科、婚检中心生育能力正常的人群100例，其中男40例，女60例。标本由临床医生严格按无菌操作规程采集。女性患者取子宫颈内口1 cm～2 cm处棉拭子置含1 ml生理盐水的无菌试管送检，男性患者取尿道内口约2 cm～3 cm处棉拭子置含1 ml生理盐水的无菌试管送检。 1.2 仪器和试剂 中山大学达安公司生产的DA7600自动荧光定量PCR仪；试剂均为中山大学达安基因诊断中心产品。 1.3 实验方法 标本洗涤液12 000 r/min,离心5 min，去上清液，用碱裂解法提取UU和CT的DNA置DA6700自动荧光定量PCR仪扩增。最后由仪器自动分析检测出定量结果。对测出定量结果进行统计学分析，患者感染率与正常人群资料对比采用chi;2检验，女性和男性UU或CT感染者基因拷贝数的差异采用样本均数的t检验。 2 结果 238例不孕不育患者中有129例的受检标本检测出 UU或CT，检出率（54.2%）与正常人群（17.0%）差异显著(P＜0.01)；UU-DNA阳性106例，CT-DNA阳性42例，UU和CT混合感染（UU+CT阳性）19例，男性UU和CT感染率分别为40.6%和25.6 %，女性UU和CT感染率分别为46.7%和13.1%，UU的感染率明显高于CT(P＜0.05)；男性和女性患者感染UU和CT的基因拷贝数差异无明显 (P＞0.05，P＞0.05)。(见表1)。表1 238例患者UU和CT的FQ-PCR检测结果（略） 3 讨论 UU和CT感染后主要引起泌尿生殖系局部炎症反应及并发一系列病理改变。医学研究证实[1,2]，男性泌尿生殖系感染UU和CT 后可直接由感染引起局部炎症导致尿道炎、附睾炎、前列腺炎，继而引起睾丸组织的病理变化，造成精子质量和受精功能下降，精浆的生理成分改变等因素均可导致男性不育；女性UU或CT感染后引起炎性病变可使输卵管粘连、管腔变窄、阻塞导致卵子或受精卵通道障碍，子宫内膜炎干扰受精卵着床、植入及早期胚胎发育，感染诱发的变态反应和自身免疫改变等是引起女性不孕的重要因素。本组资料238例不孕不育患者中UU-DNA阳性率44.5%，CT-DNA阳性率17.6%，UU或CT的总检出率达54.2%，而正常人群则分别为12.0%、8.0%和17.0%，UU的感染率明显高于CT，说明泌尿生殖系统UU和CT感染与不孕不育有密切相关性，UU和CT感染者是不孕不育的高发人群。本地区不孕不育症患者UU、CT感染率与王亚文[3]、廖启洪[4]、吴晓宁[5]等文献报道（UU、CT感染率37.3~41.02﹪、17.8%~28.9﹪）无明显差异，CT感染率明显高于黄文珠文献报道[6]（UU、CT感染率39.4﹪,4.1﹪），本地区女性与男性患者UU和CT的基因拷贝数无明显差异性,这可能与本地区病原体的流行病学因素、诊断水平、采样诊疗习惯、设备等因素有关。FQ-PCR技术在医学检验